小鼠原代滑膜成纤维细胞

小鼠原代滑膜成纤维细胞（Mouse Fibroblast-like Synoviocytes, mFLS）是研究关节疾病，特别是类风湿性关节炎（Rheumatoid Arthritis, RA）的重要细胞模型。小鼠滑膜成纤维细胞主要来源于小鼠膝关节的滑膜组织，通常选用1至2个月大的雄性BALB/c小鼠作为实验动物。在无菌条件下，通过安乐死后切开膝关节，剥离滑膜组织及周围纤维层，清洗后去除血液和脂肪，将组织剪碎并用胶原酶等酶消化以获得单个细胞。滑膜是关节囊的内层，主要由疏松结缔组织构成，其主要功能是分泌滑液以润滑关节并维持其稳定。滑膜中的细胞分为A型和B型，其中B型滑膜成纤维细胞具有较强的增殖能力，能在体外实现传代培养。滑膜成纤维细胞在正常关节功能的维持及炎症病理过程的研究中起着关键作用，广泛应用于关节疾病的机制探讨和药物研究。

小鼠原代滑膜成纤维细胞特性特征

• 小鼠滑膜成纤维FLS细胞不含有HIV-1、HBV、HCV及其他常见污染物。

• 标志蛋白：FLS细胞表达多种成纤维细胞标志蛋白，如波形蛋白（Vimentin）、纤维连接蛋白（Fibronectin）和胶原蛋白（Collagen）。

• 炎症因子：FLS细胞能够分泌多种炎症介质，包括肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）等，这些因子在类风湿性关节炎的病理过程中发挥关键作用。

• 基因表达：FLS细胞在正常和病理状态下表现出不同的基因表达谱。在类风湿性关节炎中，这些细胞的促炎基因表达显著上调。

• 相关研究表明，FLS中NF-κB信号通路的激活与RA的发展密切相关。

• 信号传导：FLS对外界刺激（如细菌感染或损伤）的反应依赖于多条信号通路，包括MAPK和JAK/STAT通路，这些通路调控细胞增殖、凋亡及炎症反应

小鼠原代滑膜成纤维细胞参数表

小鼠原代滑膜成纤维细胞培养教程

mFLS细胞复苏

• 预先将37℃水浴槽准备好，并准备专用培养基。
  

• 从液氮罐中取出冻存的mFLS细胞管，迅速置于37℃水浴中摇晃，使细胞完全解冻（约1-2分钟）。
  

• 解冻后，用75%乙醇消毒细胞管外壁，转移至超净工作台。

• 将细胞悬液移至含10 ml培养基的离心管中，以1000 rpm离心5分钟去除冷冻保护剂。

• 弃去上清液，将细胞沉淀重悬于新鲜培养基中，接种至培养瓶，置于37℃、5% CO₂培养箱中培养。

• 换液：复苏后12小时观察贴壁情况，次日更换新鲜培养液，去除未贴壁细胞和残余冷冻剂。

mFLS细胞冻存

• 将mFLS细胞培养至对数生长期，弃培养液，使用胰蛋白酶消化细胞，加入培养基终止消化。
  

• 以1000 rpm离心5分钟，弃去上清液，用预冷的冻存液重悬细胞，细胞浓度调整为1×10⁶-1×10⁷ cells/ml。

• 分装至冻存管，每管1 ml，确保密封。

• 将冻存管置于程序降温盒中，-1℃/分钟降温至-80℃，24小时后转移至液氮罐长期保存。

mFLS细胞传代

• 贴壁观察：当mFLS细胞汇合度达到80%-90%时，开始传代。

• 弃去培养瓶中的旧培养基，用PBS洗涤细胞1次。
  

• 加入胰蛋白酶（0.25%），37℃孵育1-2分钟，待细胞轻轻拍打后脱落。

• 加入新鲜培养基终止消化，将细胞悬液转入离心管，以1000 rpm离心5分钟。

• 弃去上清液，重悬细胞至新鲜培养基中，按1:3-1:5比例接种至新的培养瓶中。

• 培养条件：37℃、5% CO₂培养箱中继续培养，2-3天换液一次。