
HRaSF-SV40人风湿性关节炎滑膜成纤维细胞永生化 (暂不提供)
- 来源:关节;滑膜成纤维细胞;SV40永生
- 细胞特征:贴壁细胞 , 成纤维细胞
- 培养基:成纤维细胞样专用培养基
- 其他:表达CD90、CD105等间充质干细胞相关表面抗原
HRaSF-SV40细胞是通过从风湿性关节炎患者的滑膜组织中分离的原代滑膜成纤维细胞,经过慢病毒转染引入SV40基因而建立的永生化细胞株。HRaSF-SV40细胞在适当的培养条件下能够稳定传代超过20代。HRaSF-SV40细胞保持了其原代成纤维细胞的形态特征和贴壁生长的特性。
HRaSF-SV40人风湿性关节炎滑膜成纤维细胞特性
HRaSF-SV40细胞表达CD90、CD105等间充质干细胞相关表面抗原,这些标志物在细胞的增殖和分化中起重要作用。
HRaSF细胞中SV40基因的表达使其获得了无限增殖的能力,SV40是一个常用的永生化基因,能够抑制细胞的衰老过程。
HRaSF-SV40细胞能够分泌多种促炎细胞因子,这些因子在类风湿关节炎的病理过程中起着重要作用。
HRaSF细胞在培养过程中表现出较高的增殖能力,这与其永生化特性密切相关。
疾病模型:HRaSF-SV40细胞被广泛应用于类风湿关节炎的研究,特别是在探讨滑膜成纤维细胞在疾病进程中的作用
HRaSF-SV40成纤维细胞参数表
细胞名称 | HRaSF-SV40 (人风湿性关节炎滑膜成纤维细胞永生化) |
别名 | HRaSF(SV40) |
来源 | 人类风湿性关节炎患者的滑膜组织 |
细胞形态 | 成纤维细胞样 |
细胞类型 | 贴壁细胞 |
生物安全等级 | 2级 |
致瘤性 | 无 |
培养基 | 成纤维细胞专用培养基 |
培养环境 | 37°C, 5% CO2, 饱和湿度 |
换液周期 | 2-3天 |
培养基体积 | T25瓶 10-12 ml; 10 cm皿 12-15 ml |
传代比例 | 1:2-1:4(具体视细胞生长速度及密度决定) |
冻存液配方 | 冻存液:55%基础培养基+40% FBS+5% DMSO 温度:液氮 |
冻存规格 | 200-300万细胞/ml, 1 ml/管 |
表面标志物 | CD90, CD105(间充质干细胞相关标志物) |
SV40基因表达 | 永生化细胞特性,允许无限增殖 |
研究领域 | 类风湿关节炎机制研究、药物筛选、治疗靶点探索 |
细胞活性 | 细胞增殖能力强,分泌促炎因子 |
培养教程
HRaSF-SV40人风湿性关节炎滑膜成纤维细胞永生化培养教程
细胞复苏与初代培养
从液氮中取出冻存管,并立即将其放入37°C水浴中,轻轻晃动至细胞完全融化。
将融化的HRaSF细胞悬液转移至15 ml离心管中,加入5 ml预热的完全培养基。
以900 rpm离心3-5分钟,弃去上清液。
用2 ml完全培养基重悬细胞沉淀,并将其均匀接种于预先涂布Matrigel的T25培养瓶中。
向培养瓶中加入10-12 ml完全培养基,轻轻晃动以确保HRaSF细胞均匀分布。
将培养瓶放置于37°C、5% CO2、饱和湿度的培养箱中进行培养。
24小时后检查细胞贴壁情况,如发现HRaSF细胞未完全贴壁,可轻拍培养瓶以促进细胞贴壁。
每2-3天更换培养基一次,直至HRaSF细胞达到80%汇合度。
常规传代培养
吸去培养基,用PBS轻轻冲洗HRaSF细胞两次。
加入适量0.25%胰酶-EDTA溶液(约1 ml对于T25瓶),轻轻晃动培养瓶以确保胰酶均匀覆盖HRaSF细胞层。
将培养瓶置于37°C培养箱中消化5-10分钟。
观察显微镜下HRaSF细胞间隙是否增大但未完全脱落时,立即加入2-3倍体积的完全培养基以终止消化。
使用移液枪轻轻吹打HRaSF细胞,使其充分分散。
将细胞悬液转移至15 ml离心管中,进行900 rpm离心3-5分钟。
弃去上清液,使用预热的完全培养基重悬HRaSF细胞。
根据需要的接种比,将HRaSF细胞均匀接种于新的培养瓶中(传代比1:2至1:4)。
加入适量的完全培养基,轻轻晃动培养瓶以确保HRaSF细胞均匀分布。
将培养瓶置于37°C、5% CO2的培养箱中继续培养。
每2-3天更换培养基一次,当HRaSF细胞达到80%汇合度时进行下一次传代。
注意事项
胰酶的消化时间可能因品牌而异,需严格控制以避免过度消化HRaSF细胞。
在传代过程中,操作要尽量轻柔,以避免产生气泡和细胞损伤。
使用推荐的完全培养基,以确保HRaSF细胞的最佳生长状态,避免生长缓慢或死亡。
对于原代永生化的HRaSF细胞,建议尽早完成实验,以确保细胞质量和实验结果的可靠性。
相关资料
STR鉴定及相关
参考文献
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