HOB细胞系（人成骨细胞SV40永生化） （暂不提供）

HOB-SV40细胞系是一种通过慢病毒转染技术引入SV40大T抗原基因，从而实现原代人成骨细胞永生化的细胞系。HOB细胞系来源于正常人关节骨组织的原代成骨细胞，通过基因转染，SV40大T抗原基因被整合到细胞中，干扰了细胞周期调控机制，通过与关键的生长抑制基因p53和pRB相互作用，抑制其功能，使细胞获得了持续增殖的能力。

HOB-SV40永生化细胞系特性特征

• 永生化过程：通过慢病毒转染技术引入SV40大T抗原基因，SV40大T抗原通过与细胞生长抑制基因p53和pRB结合，抑制其功能，使细胞获得无限增殖能力。

• 细胞形态：HOB-SV40细胞呈长梭状，具有成纤维细胞样的形态，适合贴壁生长。

• 生长特性：在适宜的培养条件下，HOB-SV40细胞能够稳定传代20代以上，表现出良好的增殖能力和生长状态。

• 基因表达：HOB-SV40细胞系能够表达多种成骨相关基因，包括但不限于碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素（OCN）和骨形态发生蛋白（BMP），这些基因在成骨细胞的生物学功能中起着重要作用。

• 细胞周期调控：由于SV40大T抗原的表达，HOB-SV40细胞在细胞周期调控方面表现出异常，能够持续增殖而不受到正常细胞生长抑制机制的限制。

HOB细胞系参数表

HOB人成骨细胞SV40永生化培养教程

HOB细胞复苏

• 将冻存的HOB细胞在37℃水浴中快速解冻，期间轻轻摇晃冻存管以加速解冻过程，通常1-2分钟即可。
  

• 解冻后，迅速将HOB细胞悬液转移至含有4-6ml预热好的完全培养基的离心管中，轻轻混匀。

• 在1000rpm下离心3-5分钟，弃去上清液。
  

• 加入适量的新鲜完全培养基（5-10ml），轻轻重悬HOB细胞，避免产生气泡。

• 将重悬后的HOB细胞转移至T25培养瓶中，补充完全培养基至10-12ml。
  

• 将培养瓶放入37℃、5% CO₂的培养箱中静置培养。

HOB细胞传代操作

• 当HOB细胞覆盖培养瓶底面积的80%-90%时，应进行传代操作。
  

• 去除培养基：用移液管吸干培养瓶中的旧培养基。
  

• 润洗HOB细胞：加入3-4ml常温PBS轻轻润洗细胞，约10-20秒后吸尽PBS。

• 消化HOB细胞：加入1ml 0.25%胰酶溶液覆盖HOB细胞层，轻轻晃动培养瓶以确保胰酶均匀分布。

• 观察消化：将培养瓶放回培养箱中消化1-3分钟，观察HOB细胞变圆但未完全脱落时，立即加入2-3ml完全培养基终止消化。

• 离心：混匀后以900rpm离心3-5分钟，弃去上清液。

• 重悬HOB细胞：加入新鲜完全培养基轻轻重悬HOB细胞，并按照1:2至1:4的比例分配到新的培养瓶中。

• 静置培养：补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱中继续培养。

HOB细胞培养注意事项

• 消化时间控制：不同品牌的胰酶对HOB细胞的消化时间可能有所不同，建议严格控制消化时间，以避免HOB细胞受损。

• 操作轻柔：在传代和重悬HOB细胞时，尽量保持轻柔，避免产生气泡，这有助于维持HOB细胞的健康状态。

• HOB细胞状态监控：定期检查HOB细胞的形态和生长状态，以确保细胞处于良好状态。

• 冻存后的HOB细胞应尽快取出一管进行复苏，以验证冻存效果。如果发现HOB细胞存活率较低，应及时调整冻存和复苏条件。

HOB细胞冻存

• 推荐使用92% FBS + 8% DMSO的冻存液配方。对于更有经验的研究人员，可以使用92%完全培养基 + 8% DMSO的配方。
  

• 消化HOB细胞并离心后，加入预先配置好的冻存液重悬HOB细胞。
  

• 将HOB细胞悬液分装到标记好的冻存管中。

• 将冻存管放入程序降温盒中，置于-80℃冰箱过夜，随后转移到液氮中长期保存。