
hfob 1.19细胞(人SV40转染成骨细胞) (暂不提供)
- 来源:成骨细胞;SV40转化,条件永生
- 细胞特征:贴壁细胞 , 梭形细胞
- 培养基:生长培养基:DMEM/F12+0.3mg/mL G418+10% FBS+1% P/S
- 其他:hfob 1.19细胞永生化方式为SV40大T抗原转化
hfob 1.19细胞(人SV40转染成骨细胞)是在0.6 mg/mL G418存在下,通过用温度敏感表达载体pUCSVtsA58和新霉素抗性表达载体pSV2-neo转染从自发流产获得的肢体组织而建立的成骨细胞系。
hfob 1.19细胞特性
hfob 1.19细胞提供了同质、快速增殖的模型系统,用于研究正常人成骨细胞分化、成骨细胞生理学等。
hfob 1.19细胞永生化方式为SV40大T抗原转化。
hfob 1.19细胞是二倍体(43%)和四倍体(57%)。
抗原表达:SV40 T抗原。
基因表达:碱性磷酸酶。
在允许温度33.5°C下生长,表现出快速的细胞分裂(加倍时间36小时),在39.5°C的限制温度下几乎没有细胞分裂,加倍时间为96小时。
hfob 1.19细胞具有分化为表达正常成骨细胞表型的成熟成骨细胞能力。在限制性温度下,细胞分裂减慢,分化增加,并产生更成熟的成骨细胞表型。
引种自ATCC CRL-11372。
hfob 1.19细胞参数表
细胞名称 | hFOB 1.19 |
细胞别称 | hFOB1.19; hFOB |
细胞类型 | 人SV40转染成骨细胞 |
细胞来源 | 自然流产的胎儿四肢组织 |
转染载体 | 温度敏感表达载体pUCSVtsA58,新霉素抗性表达载体pSV2-neo |
选择剂 | 0.6 mg/mL G418 |
形态 | 成骨细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
分裂时间 | 在33.5℃下约36小时,在39.5℃下约96小时 |
分化特性 | 在限制温度下(39.5℃)分化增加,生成更成熟的成骨细胞表型 |
永生化方法 | SV40大T抗原转化 |
抗原表达 | SV40 T抗原 |
基因表达 | 碱性磷酸酶 |
倍体 | 二倍体(43%),四倍体(57%) |
生长特性 | 在33.5°C下快速生长(加倍时间36小时),在39.5°C下几乎无细胞分裂(加倍时间96小时) |
培养基 | Alpha MEM(Minimum Essential Medium)+0% FBS(胎牛血清)+0.6 mg/mL G418 |
培养温度 | 33.5℃(许可温度),39.5℃(限制温度) |
细胞传代 | 传代比率:1:4到1:8 |
消化液 | 0.25% 胰蛋白酶-EDTA溶液 |
冻存条件 | 90% FBS + 10% DMSO |
应用领域 | 成骨细胞分化和生理学,激素和生长因子对成骨细胞功能及分化的影响 |
模型系统 | 提供同质、快速增殖的模型系统,用于研究正常人成骨细胞 |
特殊说明 | 在培养过程中需要注意温度变化对细胞生长和分化的影响 |
来源机构 | ATCC CRL-11372 |
培养教程
hfob 1.19细胞培养教程
复苏细胞步骤
将含有1mL hFOB 1.19细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻。
加入5mL预热的培养基混合均匀。
在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液。
补加4-6mL培养基后轻轻吹打使细胞悬浮。
将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6cm皿中)。
第二天换液并检查细胞密度。
细胞传代步骤
当hFOB 1.19细胞密度达80%-90%时,即可进行传代培养。
弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟。
在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速取回操作台,轻敲几下培养瓶后加5ml含10%血清的培养基终止消化。
轻轻吹打细胞,使细胞完全脱落后吸出,在1000RPM条件下离心8-10分钟,弃去上清液。
补加1-2mL培养基后轻轻吹打使细胞悬浮。
按5-6ml/瓶补加培养基,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含5-6 ml培养基的新皿中或者瓶中。
收到细胞后处理
若客户收到2ml小管hFOB 1.19细胞,用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内,严格无菌操作。
将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿,加入5ml左右培养基混匀,放入培养箱过夜培养。
次日查看细胞密度:
若密度未超过80%,换液继续培养,视情况传代或者冻存。
若密度超过80%,可直接进行传代(方法同上)。
相关资料
STR鉴定及相关
Amelogenin | X |
CSF1PO | 10,13 |
D2S1338 | 23,24 |
D3S1358 | 17,18 |
D5S818 | 11,12 |
D6S1043 | 13,16 |
D7S820 | 8,10 |
D8S1179 | 10,14 |
D12S391 | 20,23 |
D13S317 | 11,12 |
D16S539 | 9,13 |
D18S51 | 10,17 |
D19S433 | 13,15 |
D21S11 | 29,32.2 |
FGA | 19,22 |
Penta E | 8,11 |
TH01 | 7,9.3 |
TPOX | 11 |
vWA | 16,18 |