
k562细胞系 (人慢性髓系白血病细胞)
- 来源:K-562细胞系(人慢性髓原白血病细胞)是从一名53岁的慢性粒细胞白血病患者的骨髓中分离的成淋巴细胞。
- 细胞特征:K562细胞是非粘附性的悬浮细胞,通常呈现出圆形或卵圆形,其大小和形态会根据培养条件的不同而有所变化
- 培养基:生长培养基:RPMI-1640+10% FBS+1% P/S
- 其他:K-562细胞系被广泛用作自然杀伤测定的高灵敏度体外靶标。
K562细胞系源自于一位患有慢性髓系白血病(CML)的患者的骨髓样本。k562细胞系最初是由Peter Nowell和David Hungerford于1960年代早期首次分离和鉴定的。科学家通过对白血病患者骨髓样本的研究,发现了一种独特的染色体异常,即所谓的Philadelphia染色体。这个染色体异常在CML患者中很常见,成为CML的标志性特征之一,通过细胞培养技术,Nowell和Hungerford成功地从患者的骨髓中分离出了这种异常细胞,并建立了K562细胞系。
K-562细胞还具有分化的潜力,可以通过添加特定的诱导剂或改变培养条件来诱导其向特定细胞类型分化,如红细胞、粒细胞、巨噬细胞等。这些分化通常通过添加相应的细胞因子或化合物来实现,如5-羟基尿嘧啶、花青素、Retinoic Acid等。
K-562细胞抗原表达中CD7占25%;同工酶包括AK-1、ES-D、G6PD、GLO-I、Me-2、PGM1和PGM3等。
k562细胞系是一种三倍体的干细胞,其中2S组分约占总核型的4.2%。在S中期,几乎所有细胞都会出现15个标记物(M1和M(15))。虽然偶尔会出现自发性非特异性双心室现象,但发生频率较低,且不稳定的标记物也相对较少。X染色体不育,而N9是无效的。
K-562细胞表现出一定的致瘤性,裸鼠皮下接种107个细胞后,在21天内以100%的频率(5/5)发展成肿瘤。
K-562细胞群体具有高度未分化和粒细胞系列的特征。通过对表面膜性质的研究,Anderson等人得出了K-562是人类红白血病系的结论。K-562母细胞是多能造血恶性细胞,可自发分化为红细胞、粒细胞和单核细胞系列的可识别祖细胞。此外,Koeffler和Golde对源自原始K-562细胞系的亚系的诱导剂影响进行了综述,而Dimery等人将K-562亚系的核型研究分为三组(A、B、C)。
EBNA测试结果显示K-562细胞系为阴性。
K-562细胞系参数表
名称 | k562细胞系-人慢性髓系白血病细胞 |
别称 | K562; K 562; GM05372; KO; GM05372E |
种属 | 人 |
细胞形态 | 淋巴细胞样 |
生长特性 | 悬浮细胞 |
冻存条件 | 冻存液:90%FBS+10%DMSO |
生长培养基 | RPMI-1640+10%FBS+1% P/S |
生长条件 | 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。 |
推荐换液频率 | 2-3次/周 |
倍增时间 | ~48 hours |
致瘤性 | Yes, in nude mice (Tumors developed within 21 days at 100% frequency (5/5) in nude mice inoculated subcutaneously with 1 × 10^7 cells). |
抗原表达 | CD7 (25%) |
背景描述 | 连续细胞株K-562是由Lozzio从一位临终的53岁女性慢性骨髓性白血病患者的胸水中建立。 |
年龄(性别) | 女性;53岁 |
组织来源 | 骨髓;慢性骨髓性白血病(CML) |
细胞类型 | 肿瘤细胞 |
肿瘤类型 | 白血病细胞 |
生物安全等级 | BSL-1 |
收藏机构 | ATCC; CCL-243 BCRC; 60007 BCRJ; 0126 CCLV; CCLV-RIE 0439 DSMZ; ACC-10 ECACC; 89121407 |
Comments | 该细胞为高度未分化的粒性白细胞系,EBNA阴性。研究表明其为红白血病细胞系。 |
培养教程
培养基和添加剂:
使用高糖培养基(例如DMEM)或RPMI 1640等基本培养基。
添加10-20%的热灭活的胎牛血清(FBS)或人血清(HS)作为生长因子。
可选添加抗生素(例如青霉素/链霉素)以预防细菌污染。
培养条件:
将K-562细胞以悬浮培养方式进行。
培养温度通常为37摄氏度。
CO2浓度一般为5%。
定期更换培养基,通常每2-3天更换一次。
传代:
采用离心收集细胞,洗涤后重新悬浮。
细胞密度应根据实验需要进行调整,通常维持在5x10^5到1x10^6细胞/ml。
k562细胞该细胞为悬浮细胞,请注意离心收集细胞悬液;请勿直接倒掉细胞培养液。
分化诱导:
K-562细胞具有分化潜力,可通过添加特定的诱导剂或改变培养条件来诱导其向特定细胞类型分化。
常用的诱导剂包括5-羟基尿嘧啶、花青素和Retinoic Acid等。
细胞冻存:
使用适当的冻存液,如含10% DMSO的培养基和20% FBS或HS。
快速冻存并存储于液氮中,以确保细胞的长期保存。
检测细胞认证和纯度:
定期检测细胞的特性,确保其保持所需的形态、生长特性和分化能力。
确认细胞的纯度和认证状态,以避免实验结果的误差。
常见问答
- 我如何传代培养K-562-GFP细胞?
- 对细胞进行胰蛋白酶化并测定总的活细胞。在新鲜完全生长培养基中将细胞稀释至所需的接种密度(1 x 105个细胞/mL),并在适当的培养皿中加入二氢嘌呤霉素(Sigma目录号P9620)至最终浓度为0.5µg/mL。
- 对于体内应用,大多数成像系统的预期荧光水平是多少?
- 测试所有体内荧光素酶报告细胞系以实现最小1000光子/秒/细胞。大多数细胞类型可以实现相当多的荧光(>100000光子/秒/细胞)
- 在体内小鼠模型中,应该使用多少细胞进行注射?
- 研究结果表明,大约3 x 106个细胞可用于注射。实验参数可以根据需要进行优化。
- 动物注射的植入途径是什么?
- 对于大多数细胞系,在两侧皮下注射用于测试和验证。根据具体的实验设计,也可以使用其他路线。
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STR鉴定及相关
STR点位信息
Amelogenin | X |
CSF1PO | 9,10 |
D1S1656 | 15,16 |
D2S441 | 10,14 |
D2S1338 | 17 |
D3S1358 | 14,16 (DSMZ) |
16 (CCRID; CLS; Genomics_Center_BCF_Technion; PubMed=14642717; PubMed=19372543; PubMed=25877200) | |
D5S818 | 11,12 (AddexBio; ATCC; CCRID; CLS; Cosmic-CLP; COG; DSMZ; ECACC; Genomics_Center_BCF_Technion; JCRB; KCLB; PubMed=14642717; PubMed=15637111; PubMed=19372543; PubMed=25877200; TKG) |
11,12,13 (RCB) | |
D7S820 | 9,11 |
D8S1179 | 12 |
D10S1248 | 12 |
D12S391 | 23 |
D13S317 | 8 |
D16S539 | 11,12 (AddexBio; ATCC; CCRID; CLS; Cosmic-CLP; COG; ECACC; Genomics_Center_BCF_Technion; JCRB; PubMed=14642717; PubMed=15637111; PubMed=19372543; PubMed=25877200; TKG) |
D18S51 | 15 (CLS) |
15,16 (CCRID; Genomics_Center_BCF_Technion; PubMed=14642717; PubMed=15637111; PubMed=19372543) | |
D19S433 | 14,14.2 (CCRID; CLS; Genomics_Center_BCF_Technion; PubMed=14642717; PubMed=19372543) |
14,15 (DSMZ) | |
D21S11 | 29,30 (CLS; DSMZ; PubMed=15637111) |
29,30,31 (Genomics_Center_BCF_Technion; PubMed=14642717; PubMed=19372543; PubMed=25877200) | |
D22S1045 | 16 |
DXS101 | 23,24 |
FGA | 21,24 |
Penta D | 9,13 |
Penta E | 5,14 |
SE33 | 26.2,28.2 |
TH01 | 9.3 |
TPOX | 8,9 |
vWA | 16 |
参考文献
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