MLOY4细胞（小鼠骨样细胞系）

MLO-Y4小鼠骨样细胞系是由Lynda F. Bonewald教授团队于1997年在美国德克萨斯大学卫生科学中心建立。MLOY4细胞系是通过从14日龄的（C57BL/6J x BALB/cJ）F2 Bgla启动子T-Ag转基因小鼠中分离骨细胞，然后通过SV40大T抗原的表达进行永生化而得到的。
MLO-Y4细胞与原代骨细胞在性质上非常相似，但与成骨细胞不同。MLOY4细胞具有显著的骨细胞特性。

MLOY4细胞呈现典型的树突状形态，与体内骨细胞相似、产生广泛、复杂的树突突起、上皮细胞样形态，贴壁生长。

MLOY4小鼠骨样细胞系特性特征

分子和表达特征

• 高表达骨钙素（osteocalcin）

• 低表达碱性磷酸酶（alkaline phosphatase）

• 产生非常少量的I型胶原mRNA

• 表达T抗原（T-antigen）

• 表达骨桥蛋白（osteopontin）

• 表达神经抗原CD44

• 高表达缝隙连接蛋白43（connexin 43）

• 表达抗原E11

基因特征

• 缺乏可检测到的成骨细胞特异性因子2（Cbfa1/Runx2）的mRNA表达

• SV40大T抗原在骨钙素启动子控制下表达，实现细胞永生化

功能特征

• 对机械刺激高度敏感

• 具有一定的成骨能力和骨吸收能力

• 能够分泌多种细胞因子和生长因子，参与骨重塑过程

其他特征

• 来源于14天龄(C57BL/6J x BALB/cJ)F2 Bgla启动子T-Ag转基因小鼠的长骨

• 性质与原代骨细胞非常相似，但与原代成骨细胞有所不同

• 适用于研究机械应力对骨细胞功能的影响

• 可用于研究骨细胞与其他骨细胞（如成骨细胞和破骨细胞）的相互作用

MLOY4细胞参数表

MLOY4小鼠骨样细胞系培养教程

细胞复苏

• 收到MLOY4细胞后，用75%酒精消毒细胞瓶外表面。

• 将T25培养瓶放置于37°C培养箱中2-3小时，使MLOY4细胞逐渐恢复。

• 在显微镜下（4x或5x）观察MLOY4细胞状态，确保MLOY4细胞健康并记录图像（10x和20x各2-3张）。

• 检查MLOY4细胞的生长和贴壁情况。

细胞培养

• 低密度培养：如果MLOY4细胞密度低于60%，去除旧的培养基，加入6-8mL新配制的完全培养基，继续培养。

• 高密度培养：如果MLOY4细胞密度达到70%-80%，进行传代。

• 注意：运输中的培养基不可用于MLOY4细胞培养，需用新鲜配制的完全培养基。

细胞传代

• 第一次传代时，建议将T25培养瓶以1:2的比例传代MLOY4细胞。

• 如果因运输振动导致MLOY4细胞脱落，可通过离心回收这些MLOY4细胞。

细胞冻存

• 冻存液配方：90%血清 + 10% DMSO。建议现用现配，以保持MLOY4细胞冻存液的新鲜度。

注意事项

• MLOY4细胞仅限于科研使用。

• 如发现培养瓶破损、液体溢出或MLOY4细胞污染，请立即拍照并联系供应商。

• 在运输过程中，MLOY4细胞可能会因振动而脱落或聚集成团，需特别注意。

• 定期观察MLOY4细胞状态，确保及时处理问题。

常见问题处理

培养基污染处理

• 立即隔离：将污染的MLOY4细胞培养瓶从培养箱中取出，防止扩散。

• 记录和拍照：详细记录污染情况，并拍照以备记录。

• 废弃处理：按照生物安全规程对污染的MLOY4细胞进行灭菌后废弃。

• 清洁消毒：彻底清洁和消毒相关设备，防止交叉污染。

• 检查原因：分析污染可能来源，如操作过程、试剂质量等。

• 重新培养：使用新无菌的培养基和器具重新开始MLOY4细胞培养。

• 预防措施：加强无菌操作技术，定期检查设备和试剂质量。

细胞贴壁不良处理

• 延长贴壁时间：将MLOY4细胞培养瓶放回37°C培养箱，延长贴壁时间至4-6小时。

• 增加血清浓度：短期内将血清浓度提高至15-20%以促进MLOY4细胞贴壁。

• 调整培养基pH：确保pH在7.2-7.4，可能需要调整CO2浓度。

• 使用细胞外基质：用胶原蛋白或纤连蛋白处理培养表面增强MLOY4细胞贴壁。

• 降低传代密度：若传代后MLOY4细胞贴壁不良，可适当降低传代密度。

• 检查培养基成分：确保营养成分充足以满足MLOY4细胞的需求。

• 避免机械损伤：操作要轻柔，避免对MLOY4细胞的过度震荡。

• 优化培养条件：调整温度、湿度等以确保MLOY4细胞的最佳生长环境。