MNNG/HOS Cl #5 [R-1059-D]细胞（人骨肉瘤细胞）

MNNG/HOS Cl#5[R-1059-D]是一种人骨肉瘤细胞系，源自一名13岁白人女性患者的骨肉瘤组织。
MNNG/HOS Cl#5细胞系是通过使用0.01 mcg/ml的MNNG（N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍）处理原始HOS细胞而得到的，MNNG是一种已知的致癌亚硝胺，能够诱导细胞转化。

MNNG/HOS Cl #5细胞特性特征

• 由HOS细胞经0.01 mcg/ml MNNG（N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍，一种致癌亚硝胺）转化而来
  

• 生长特性：贴壁生长、表现出高饱和密度

• mnnghos细胞在软琼脂中具有高平板效率（克隆形成率高）

• 致瘤性：mnnghos细胞在裸鼠中具有强烈的致瘤性，皮下接种107个细胞后，21天内以100%的频率（5/5）形成肿瘤

• 分子特征：同工酶：G6PD（葡萄糖-6-磷酸脱氢酶）为B型

• 由于MNNG处理，可能存在额外的DNA损伤或突变

• 研究表明，从MNNG/HOS细胞中分离的细胞外囊泡(EVs)可以影响成骨细胞的生成。这些EVs能降低细胞周期和促成骨细胞基因的表达，同时增加促破骨细胞/炎性细胞因子（如RankL、Il1b、Il6和Lcn2）和促肿瘤细胞因子（如CCL2）的表达
  

MNNG/HOS Cl #5细胞参数表

MNNG/HOS Cl #5人骨肉瘤细胞培养教程

MNNGHOS细胞复苏步骤

• 从液氮中取出冻存管，迅速置于37°C水浴中，轻轻摇动至完全融化。

• 将MNNGHOS细胞悬液转移到含有预热培养基的离心管中。

• 以1000 rpm 离心5分钟，弃去上清。

• 用新鲜培养基重悬MNNGHOS细胞，并转移到培养瓶中。

常规培养

• 使用T25培养瓶，接种密度为1×10^6 cells/瓶。

• 每2-3天更换一次培养基。

• 观察MNNGHOS细胞生长状态，保持细胞在对数生长期。

传代步骤

• 当MNNGHOS细胞汇合度达到80-90%时进行传代。

• 用PBS轻轻洗涤细胞层。

• 加入适量胰蛋白酶-EDTA溶液，37°C孵育2-3分钟。

• 轻轻拍打培养瓶，观察细胞脱落。

• 加入含血清的培养基终止消化。

• 以1000 rpm 离心5分钟，弃去上清。

• 用新鲜培养基重悬MNNGHOS细胞，按1:3或1:4的比例传代。

细胞冻存步骤

• 收集对数生长期的MNNGHOS细胞。

• 配制冻存液（90% FBS + 10% DMSO）。

• 调整MNNGHOS细胞浓度至1-2×10^6 cells/ml。

• 将MNNGHOS细胞悬液分装到冻存管中。

• 使用程序降温盒，置于-80°C过夜。

• 转移到液氮中长期保存。

注意事项

• 定期检查: 定期观察MNNGHOS细胞形态和生长状态。

• 无菌操作: 保持无菌操作，预防污染。

• STR鉴定: 定期进行STR鉴定，确保MNNGHOS细胞系纯度和一致性。

• 生物安全: 由于这是一种转化的肿瘤细胞系，处理时需遵守相关的生物安全规程。

常见问题与解决方法

常见错误

• 培养基错误: 未使用推荐的MEM + 10% FBS + 1% P/S。

• 接种密度不当: 未按照建议的1×10^6 cells/T25培养瓶密度接种。

• 传代时机错误: 未在MNNGHOS细胞达到80-90%汇合度时进行传代。

• 消化时间过长: 胰蛋白酶处理时间过长，导致细胞损伤。

• 不适宜培养条件: 未保持37°C，5% CO2的标准培养条件。

• 污染问题: 由于操作不当导致MNNGHOS细胞培养物被细菌或真菌污染。

保障MNNGHOS细胞活性的方法

• 正确使用培养基: 严格使用推荐的MEM + 10% FBS + 1% P/S。

• 适当接种密度: 遵循1×10^6 cells/T25培养瓶的推荐密度。

• 定期观察细胞形态: 每天检查MNNGHOS细胞的生长状态和形态，确保保持上皮细胞样特征。

• 及时传代: 在MNNGHOS细胞达到80-90%汇合度时传代，避免过度生长。

• 控制消化时间: 传代过程中密切观察细胞脱落，避免过度消化。

• 维持稳定的培养条件: 确保培养箱温度、CO2浓度和湿度稳定。

• 定期活性检测: 使用MTT或CCK-8等细胞活性检测试剂评估MNNGHOS细胞活力。

• 减少冻融次数: 尽量减少MNNGHOS细胞冻存和复苏次数，每次复苏后进行1-2次传代再用于实验。

• 定期STR鉴定: 确保MNNGHOS细胞系的纯度和一致性。

• 严格无菌操作: 预防污染，确保实验环境的无菌。