K7M2-WT细胞（小鼠骨肉瘤成骨细胞）

K7M2-WT细胞系于1998年从患有骨肉瘤的小鼠的骨组织中分离，K7M2-WT细胞系是通过将K7小鼠骨肉瘤细胞系注射至BALB/c小鼠的胫骨近端获得的，是一种有效的骨肉瘤模型细胞系。

K7M2-WT细胞特性特征

• 致瘤性：在BALB/c小鼠中形成肿瘤，90%以上接种的小鼠会自发转移至肺部

• 转移性： K7M2-WT细胞具备高肺转移潜能

• 抗原表达：CD31阳性

• 基因表达：分泌性磷蛋白1（骨桥蛋白，osteopontin）、凝血因子VIII、整合素结合唾液蛋白（BSP）、Biglyan、Decorin、Villin 2（ezrin）；

• 蛋白表达：骨唾液酸蛋白、Biglyan、Decorin、骨桥蛋白

• 这些基因和蛋白的表达特征表明K7M2 wt细胞属于骨谱系细胞。

• 功能特征：作为骨肉瘤研究的理想模型，特别是用于研究肿瘤转移机制、可作为转染宿主细胞

K7M2-WT细胞参数表

K7M2-WT小鼠骨肉瘤成骨细胞培养教程

K7M2-WT细胞复苏

• 从液氮中取出冻存的K7M2-WT细胞，迅速放入37°C水浴中解冻，轻轻摇动至完全融化。

• 用75%酒精擦拭冻存管表面，移入无菌操作台。

• 将K7M2-WT细胞悬液转移至15 ml离心管中，加入5 ml预热的完全培养基。

• 以1000 rpm离心5分钟，弃去上清液。

• 加入新鲜的完全培养基重悬K7M2-WT细胞，转移至培养瓶中，置于37°C、5% CO₂培养箱中培养。

K7M2-WT细胞培养

• 每日观察K7M2-WT细胞生长情况，换液频率为2-3天一次，具体视K7M2-WT细胞密度而定。

• 当K7M2-WT细胞汇合度达70-80%时，可以进行传代。

K7M2-WT细胞传代

• 吸去培养瓶中的旧培养基，用PBS缓冲液洗涤K7M2-WT细胞1-2次。

• 加入适量胰蛋白酶-EDTA溶液，置于37°C培养箱中消化1-2分钟，直至K7M2-WT细胞开始脱落。

• 轻轻敲打培养瓶底部，确保K7M2-WT细胞完全脱落。

• 加入新鲜的完全培养基终止消化，轻轻吹打混匀K7M2-WT细胞悬液。

• 将K7M2-WT细胞悬液转移至15 ml离心管中，以1000 rpm离心5分钟。

• 弃去上清液，加入适量新鲜培养基重悬K7M2-WT细胞。

• 按1:2至1:6的比例进行传代，将K7M2-WT细胞悬液分装至新的培养瓶中，置于培养箱中继续培养。

K7M2-WT细胞冻存

• 当K7M2-WT细胞汇合度达80-90%时，进行细胞冻存。

• 按上述传代步骤收集K7M2-WT细胞，并用PBS洗涤。

• 以1000 rpm离心5分钟，弃去上清液。

• 加入冻存液重悬K7M2-WT细胞，细胞密度控制在1x10⁶-1x10⁷ cells/ml。

• 将K7M2-WT细胞悬液分装至冻存管中，每管1 ml。

• 将冻存管置于程序降温盒中，以-1°C/min降温至-80°C，24小时后转移至液氮中长期保存。

注意事项

• 使用高品质胎牛血清，推荐HAKATA优等胎牛血清，以确保K7M2-WT细胞获得最佳营养和生长因子。

• 使用新鲜的DMEM高糖培养基，减少培养基老化对K7M2-WT细胞的影响。

• 维持稳定的培养环境，避免频繁开关培养箱门，减少温度和CO₂浓度的波动对K7M2-WT细胞的影响。

• 细胞传代时，胰蛋白酶消化时间不宜过长，以免损伤K7M2-WT细胞。

降低K7M2-WT细胞对外界刺激敏感性的方法：

• 使用新鲜的DMEM高糖培养基，确保K7M2-WT细胞获得最佳的营养供应。

• 使用高质量的胎牛血清，如HAKATA优等胎牛血清，提供稳定的生长因子和营养成分。

• 使用优化的完全培养基，减少额外添加成分带来的刺激。

• 保持稳定的培养环境，包括温度、CO₂浓度和湿度，避免频繁改变培养条件对K7M2-WT细胞的影响。

• 实验操作时减少对K7M2-WT细胞的机械刺激，如过度吹打或剧烈震动。