
SP20细胞(小鼠骨髓瘤细胞)
- 来源:脾脏
- 细胞特征:半贴半悬细胞,淋巴母细胞样
- 培养基:RPMI-1640+10% FBS+1% P/S
- 其他:Sp20细胞系表现出H-2d抗原的表达,且不分泌免疫球蛋白。
Sp20细胞(全名Sp2/0-Ag14细胞)是来源于小鼠脾脏的B淋巴细胞系,常用于免疫学研究。sp20细胞系通过将BALB/c小鼠的脾细胞(经绵羊红细胞免疫处理的小鼠)与P3X63Ag8骨髓瘤细胞融合形成。
SP20细胞特性特征
分子和表达特征:不分泌免疫球蛋白、对20μg/ml的8-氮鸟嘌呤具有抗性、对HAT(Hypoxanthine-Aminopterin-Thymidine)敏感
抗原表达:H-2d
应用:可用作制备单克隆抗体的细胞系、可作为细胞融合实验的伴侣细胞系、在免疫学和细胞生物学研究中是重要的工具细胞系
免疫球蛋白基因表达缺失:由于不分泌免疫球蛋白的特性,Sp2/0-Ag14细胞系在基因水平上缺乏相关的免疫球蛋白基因表达
SP20细胞参数表
细胞名称 | SP20细胞(小鼠骨髓瘤细胞) |
别称 | SP2/0-Ag14; SP2/0-AG14; SP2/0-ag14; Sp2/O-Ag14; Sp2/0-Ag-14; SP2-0-Ag14; SP2/0 Ag-14; SP-2/0-AG14; Sp 2/0-Ag 14; Sp2/0; SP2/0; SP2/O; SP-2; GM03569; GM03569B; GM3569 |
细胞类型 | 小鼠骨髓瘤细胞 |
来源 | BALB/c小鼠脾细胞与P3X63Ag8骨髓瘤细胞融合 |
形态 | 淋巴母细胞样,悬浮生长 |
生物安全等级 | 1 |
培养基 | 1640 + 10% 胎牛血清(FBS) + 1% 青霉素-链霉素(P/S) |
培养条件 | 37°C, 95% 空气, 5% 二氧化碳 |
传代方法 | 1:2 至 1:3,每周 2-3 次,传代时细胞密度达 80%-90% |
抗原表达 | H-2d |
免疫球蛋白分泌 | 不分泌 |
8-氮鸟嘌呤抗性 | 对 20μg/ml 有抗性 |
HAT 敏感性 | 对 HAT 敏感 |
病毒检测 | 鼠痘病毒(ECTV)阴性 |
支原体检测 | 通过支原体检测 |
冻存条件 | 冻存液:55% 基础培养基 + 40% FBS + 5% DMSO;温度:液氮 |
复苏方法 | 快速解冻于37℃水浴中,随后加入培养基并离心去除DMSO |
保藏机构 | ATCC(CRL-1581, CRL-8287),DSMZ(ACC-146),ECACC(85072401) |
应用领域 | 单克隆抗体生产,细胞融合实验,免疫学和细胞生物学研究 |
培养教程
Sp20小鼠骨髓瘤细胞培养教程
SP20细胞复苏
解冻SP20细胞: 将SP20细胞冻存管从液氮中取出,立即放入37℃水浴中,快速摇匀,使其在1分钟内完全融化。
稀释SP20细胞: 将解冻后的SP20细胞悬液转移到离心管中,加入4 mL培养基,轻轻混匀。
离心: 在1000 RPM下离心4分钟,弃去上清液。
重悬SP20细胞: 补加1-2 mL培养基,轻轻吹匀。
接种: 将SP20细胞悬液加入培养瓶或培养皿中,培养过夜,第二天更换培养液并检查细胞密度。
SP20细胞传代
检查SP20细胞密度: 当SP20细胞密度达到80%-90%时进行传代。
洗涤SP20细胞: 弃去培养上清,用PBS润洗SP20细胞1-2次。
消化SP20细胞: 加入1 mL消化液于培养瓶中,置于37℃培养箱中观察SP20细胞脱落情况。
终止消化: 当SP20细胞完全脱落后,加入2-3 mL培养基以终止消化反应。
离心: 将SP20细胞悬液转移至离心管中,离心1000 RPM 4分钟,弃去上清。
重悬SP20细胞: 补加适量培养基,轻轻吹匀,将SP20细胞悬液按比例接种到新的培养瓶中。
SP20细胞冻存
准备SP20细胞: 选择健康的SP20细胞,进行离心并重悬于冻存液中,细胞浓度通常为5×10⁶细胞/mL。
分装: 将1 mL SP20细胞悬液分装到冻存管中,密封并标记细胞名称和冻存日期。
冷冻: 将冻存管放入-80°C冰箱中冷冻24小时,然后转移至液氮中长期保存。
SP20细胞的生长表现
生长速度: 在适当的培养基和条件下,SP20细胞的倍增时间通常为24-36小时。
不同培养容器中的表现: SP20细胞在培养瓶、培养皿和悬浮培养系统中均表现良好,悬浮培养系统可进一步提高SP20细胞的生长速度和产量。
注意事项
保持无菌操作,避免交叉污染。
定期检查SP20细胞生长状态,确保其处于良好状态。
根据实验需求调整培养基成分和添加生长因子。
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