小鼠骨髓树突状细胞（原代细胞未成熟DC细胞）

小鼠骨髓树突状细胞（原代未成熟DC细胞）是从小鼠骨髓组织中分离并诱导分化得到的免疫细胞，广泛用于免疫学研究。

树突状细胞由骨髓单核细胞在粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）和白细胞介素-4（IL-4）的作用下分化形成，未成熟树突状细胞通常呈半贴壁生长，形成葡萄串状集落，表面具有皱褶和短刺状突起，胞内富含吞噬泡，具备较强的抗原摄取和加工能力。进一步在肿瘤坏死因子α（TNFα）或脂多糖（LPS）刺激下，未成熟树突状细胞可分化为成熟树突状细胞，呈悬浮生长，形态增大，产生大量树枝状突起，并高表达CD80、CD86和MHC-II等共刺激分子，有效激活T细胞，介导免疫应答。

未成熟树突状细胞CD80、CD86、MHC-II等分子表达较低，无法提供T细胞激活所需的第二信号，可能诱导T细胞无能或免疫耐受。

小鼠骨髓树突状细胞广泛应用于免疫耐受研究、肿瘤疫苗开发、药物递送系统和自身免疫疾病模型等领域。在实验过程中需注意细胞培养时间，超过10天后未成熟细胞的成熟率可能超过50%，建议在诱导后7天内使用。

研究表明使用自体腹膜分泌液替代传统细胞因子可降低培养成本，但诱导效率可能下降约30%。小鼠骨髓树突状细胞作为免疫调控的关键细胞类型，是探索免疫耐受、肿瘤免疫治疗和自身免疫疾病机制的重要工具。

小鼠骨髓树突状细胞(未成熟DC细胞)特性特征

• 半贴壁生长模式：初期形成葡萄串样集落，随培养时间延长逐渐脱落

• 表面超微结构：扫描电镜显示直径15-25 μm，表面布满0.5-2 μm的微绒毛状突起

• 胞内结构：透射电镜下可见发达的高尔基体及直径0.8-1.2 μm的吞噬囊泡

• 抗原处理能力：每小时吞噬≥5个1 μm乳胶颗粒；溶酶体酶活性比成熟DC高3倍

• 迁移特性：趋化因子受体CCR6表达量是成熟DC的5倍；体外迁移速率达8-12 μm/min

• 免疫调节功能：混合淋巴细胞反应刺激指数＜2.0（成熟DC＞10）；IL-12分泌量＜50 pg/mL（成熟DC＞500 pg/mL）

• 细胞因子受体：高表达GM-CSFRβ链（CD131）和IL-4Rα

• 抗原呈递相关：组成性表达CIITA调控的MHC II类基因；低表达TAP1/2抗原处理转运体

• 耐受相关基因：IDO1（吲哚胺2,3-双加氧酶）表达量是成熟DC的3倍；PD-L1基础表达量达200 MFI

• 自发成熟倾向：培养超过7天后，CD86表达每日增加8-10%
  

• 冻存敏感性：程序性冻存存活率约65%，复苏后吞噬能力下降40%
  

• 细胞周期：G0/G1期占比＞85%，增殖能力有限

• 典型鉴定标准包括：CD11c+CD80lowCD86lowMHC-IIlow表面表型，台盼蓝拒染率＞95%，支原体检测阴性

分子表达特征

小鼠骨髓树突状细胞(未成熟DC细胞)参数表

小鼠骨髓树突状细胞(原代细胞未成熟DC细胞)培养教程

细胞复苏

• 从液氮中取出BMDC细胞冻存管，迅速置于37℃水浴中解冻，直至无冰晶残留。

• 使用75%酒精消毒管外壁，确保无菌操作。

• 将BMDC细胞转移至含有5 mL完全培养基的15 mL离心管中。

• 以1000 rpm离心5分钟，去除DMSO。

• 弃去上清液后，用1-2 mL完全培养基重悬细胞。

• 将细胞悬液转移至培养瓶中，置于37℃、5% CO₂培养箱中培养过夜。

细胞传代

• 待BMDC细胞密度达到80-90%时，进行传代。

• 弃去培养基，用PBS清洗细胞一次。

• 加入0.25%胰酶-EDTA溶液（0.53 mM EDTA），37℃消化1-2分钟，直至细胞变圆并脱落。

• 加入完全培养基终止消化，轻轻吹打使细胞分散。

• 以1000 rpm离心5分钟，弃去上清液。

• 用12 mL完全培养基重悬细胞。

• 按1:2至1:6的比例分瓶，每瓶加入8 mL完全培养基。

• 将培养瓶置回37℃、5% CO₂培养箱中继续培养。

细胞冻存

• 当BMDC细胞生长状态良好时，准备进行冻存。

• 消化、终止反应并离心后，重悬于冻存液中。

• 细胞密度保持在1×10⁶/mL。

• 每个冻存管加入1 mL BMDC细胞悬液，并贴好标签。

• 将冻存管依次置于-20℃ 1.5小时、-80℃过夜。

• 最终将冻存管转移至液氮中长期保存。

注意事项

• 避免过度传代，以保持BMDC细胞特性。

• 推荐在诱导后7天内使用未成熟BMDC细胞进行实验。

• 使用自体腹膜分泌液替代传统细胞因子可降低成本，但诱导效率可能下降约30%。