小鼠外周血单个核细胞（原代细胞）

小鼠外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cells, PBMC）是指从小鼠外周血液中分离出的单核细胞群体，主要包括淋巴细胞和单核细胞，广泛应用于免疫学研究、炎症机制解析及肿瘤免疫学等领域。

外周血单个核细胞来源于骨髓造血干细胞，在骨髓中发育成熟后进入血液循环。功能上，单核细胞具有强大的吞噬能力，可清除病原体，并在循环系统中停留2-3天后迁移至组织分化为巨噬细胞，进一步参与免疫调控，分泌白细胞介素、干扰素等细胞因子，调节炎症反应和免疫应答。在应用方面，PBMC细胞常用于免疫毒性研究，如评估环境污染物或化学物质对免疫系统的影响；在人源化小鼠模型中用于重建人类免疫系统，研究免疫疾病及感染机制；同时，在肿瘤免疫和新型药物开发中，PBMC细胞可用于研究免疫检查点抑制剂、细胞因子调控及其他免疫治疗策略。

小鼠PBMC细胞在免疫防御、病原体清除及免疫稳态维持中起重要作用，其分离与应用对免疫学及生物医学研究具有重要价值。

小鼠外周血单个核细胞特性特征

• 吞噬作用：单核细胞内含有更多的非特异性脂酶，具有强大的吞噬作用。

• 细胞成熟：在组织中成熟后，细胞体积增大，直径可达50-80μm，溶酶体颗粒和线粒体数量增多。

• 免疫功能：激活的单核细胞和组织巨噬细胞能生成并释放多种细胞毒、干扰素和白细胞介素，参与机体防御机制。

• 表面标志物：小鼠单核细胞通过其细胞表面表达的Ly6C、CD11b和趋化因子受体CD192、CX3CR1来定义。

• CD115表达：高水平的CD115表达能够区分外周血单核细胞和粒细胞以及淋巴细胞。

• 趋化因子受体：表达CCR1和CCR5，这些受体结合多种趋化因子，包括CCL3和CCL5。

• 黏附分子：表达L-选择素、P-选择素糖蛋白配体1（PSGL1）、淋巴细胞功能相关抗原1（LFA1，也称为αLβ2整合素）、巨噬细胞受体1（MAC1，也称为整合素αMβ2）、血小板内皮细胞黏附分子（PECAM1）和迟现抗原4（VLA4，也称为整合素α4β1）

原代小鼠外周血单核细胞参数表

原代小鼠外周血单核细胞培养教程

复苏

• 取出冻存管：从液氮中取出PBMC细胞冻存管，迅速转移至-80℃的冻存盒中，平衡0.5-5分钟。

• 快速融化：将冻存管放入37-42℃的水浴或金属浴中，快速摇晃冻存管，使PBMC细胞冻存液迅速融化。当冻存液呈冰水混合状态时，立即停止加热。

• 准备清洗液：预先在无血清培养基中加入胎牛血清（FBS），充分混匀，并置于37℃水浴中预热，以获得适宜的PBMC细胞清洗液。

• 细胞清洗：将冰水混合液逐滴加入清洗液中，轻柔混匀3-5次，确保PBMC细胞充分适应温度变化。

• 离心收集细胞：以250g离心7分钟，弃去上清，并用37℃预热的无血清培养基重悬PBMC细胞，转移至培养容器中。

PBMC细胞传代

• 细胞密度判断：当PBMC细胞密度达到80%-100%时，可进行传代。

• 轻轻摇晃培养瓶，使PBMC细胞均匀悬浮，进行细胞计数。

• 以2-3×10^5 PBMC细胞/mL的比例进行传代，确保细胞生长稳定。

• 可使用移液管轻轻吹打培养瓶壁，使PBMC细胞从附着表面脱落。

• 传代初期建议使用一半旧培养基，一半新鲜培养基，以降低PBMC细胞适应新环境的应激反应。

• PBS清洗：在传代前，可用PBS清洗PBMC细胞，以去除死细胞及培养基中的杂质，提高细胞活力。

PBMC细胞冻存

• 冻存液配制：使用无血清培养基、胎牛血清（FBS）和DMSO，按8:1:1比例混合，作为PBMC细胞冻存液。

• 细胞悬液制备：收集PBMC细胞，并用冻存液重悬，调整浓度至2-3×10^7 PBMC细胞/mL。

• 分装冻存：将PBMC细胞悬液分装至1.8mL冻存管，每管1mL，并进行质量检测。

• 储存：冻存管先置于4℃平衡，然后放入程序降温盒，缓慢降至-80℃，最终转移至液氮长期保存。