NS1细胞系（P3/NSI/1-Ag4-1小鼠骨髓瘤细胞系）

P3/NSI/1-Ag4-1（NS-1）是小鼠骨髓瘤细胞P3X63Ag8的一个不分泌克隆。

NS1细胞株对0.1 mM 8-氮鸟嘌呤表现出抗性，但在HAT（含有次黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶的）培养基中无法生长。

NS-1细胞特性特征

• Kappa链合成但不分泌：NS1细胞能够合成Kappa轻链，但不会将其分泌到细胞外.
  

• 胆固醇营养缺陷：由于3-酮类固醇还原酶活性不足，NS1细胞是胆固醇营养缺陷型.

• 抗原表达：NS1细胞表达H-2d抗原.
  

• 免疫球蛋白表达：表达非分泌型免疫球蛋白.

• 基因特征：H-2d基因表达、免疫球蛋白基因表达（非分泌型）.

• 不分泌克隆：是P3X63Ag8细胞的一个不分泌克隆.

• 突变株：由于缺失了3-酮类固醇还原酶活性而形成的突变株.

• 经检测，NS1细胞鼠痘病毒呈阴性

NS-1小鼠骨髓瘤细胞参数表

NS-1小鼠骨髓瘤细胞培养教程

细胞传代

• 当 NS-1 细胞密度达到 1-2 × 10⁶ 细胞/mL 时进行传代。

• 通常每 2-3 天传代一次，具体频率根据 NS-1 细胞生长情况调整。

• 传代比例一般为 1:5 至 1:10。

细胞计数与活力检测

• 使用血球计数板和台盼蓝染色法检测 NS-1 细胞的数量和活力。

• 确保 NS-1 细胞活力保持在 90% 以上。

培养瓶选择

• 使用悬浮培养瓶或细胞培养袋，确保有足够的气体交换空间。

培养基更换

• 每 2-3 天更换一半培养基，或根据 NS-1 细胞的生长情况调整。

• 离心收集细胞（200g，5分钟），弃去上清液，重悬于新鲜培养基中。

注意事项

• 定期检查 NS-1 细胞的形态，确保细胞呈圆形或卵圆形，无明显碎片。

• 避免 NS-1 细胞过度生长，保持在对数生长期。

• 定期进行无菌检测，确保 NS-1 细胞培养环境无污染。

冻存与复苏

• 冻存：使用含 10% DMSO 的完全培养基，缓慢降温至 -80°C 后转移至液氮中长期保存 NS-1 细胞。

• 复苏：快速解冻 NS-1 细胞后，缓慢稀释并逐步适应培养条件，以提高细胞存活率。

特殊注意事项

• 由于 NS-1 细胞对胆固醇存在营养缺陷，可能需要在培养基中补充胆固醇或使用特殊的血清替代物。

常见问题及关键步骤

• 污染问题：NS-1 细胞培养过程中容易受到细菌、真菌或病毒污染。应确保无菌操作，使用灭菌器具和培养基。

• 细胞密度问题：NS-1 细胞密度过高可能导致死亡和形态变化，过低则影响生长。应保持适宜密度（1-2 × 10⁵ 细胞/mL）。

• 培养基更换不及时：细胞培养基中的营养物质会随着 NS-1 细胞生长而耗尽，废物积累可能抑制细胞生长。建议每 2-3 天更换一半培养基。

• 温度和 CO₂ 浓度不稳定：NS-1 细胞的培养环境的温度和 CO₂ 浓度应保持稳定。37°C 和 5% CO₂ 是最佳条件。温度波动可能影响细胞的生长和活力。

• 冻存和复苏不当：冻存 NS-1 细胞时应使用合适的冷冻保护剂（如 DMSO），并缓慢降温；复苏时应快速解冻并逐步稀释，以提高细胞存活率。

• 培养成功的关键步骤

• 无菌操作：在整个 NS-1 细胞培养过程中，保持无菌环境，使用灭菌器具，避免交叉污染。

• 适宜的培养基：使用 RPMI 1640 培养基，并添加 10-20% 胎牛血清，根据需要添加抗生素。

• 适宜的培养条件：确保 NS-1 细胞培养温度为 37°C，CO₂ 浓度为 5%，并维持适当的湿度。

• 定期监测和传代：定期检查 NS-1 细胞的形态和生长情况，及时传代，避免细胞过度生长。

• 细胞计数和活力检测：使用血球计数板和台盼蓝染色法定期检测 NS-1 细胞的数量和活力，确保细胞健康。

• 冻存和复苏技术：冻存 NS-1 细胞时使用适当的冷冻保护剂，复苏时快速解冻并逐步适应培养条件，以提高存活率。