RPMI8226细胞（人多发性骨髓瘤外周血B淋巴细胞）

RPMI8226细胞系是从一名61岁男性患者的外周血中分离出来的人B淋巴细胞，患者患有IgG lambda型多发性骨髓瘤。RPMI8226细胞系仅产生和分泌lambda轻链，而不分泌重链。RPMI 8226广泛应用多发性骨髓瘤的病理机制和治疗方法研究，并适合作为转染宿主。

RPMI 8226细胞系具有不稳定的近三倍体核型，染色体数目为68-70，并存在两条带有末端着丝粒的大标记染色体。

RPMI8226细胞特性特征

• RPMI8226细胞仅产生和分泌lambda轻链、不分泌重链；

• RPMI8226细胞不表达表面和胞浆IgG、IgM

• HLA表达：HLA Aw19, B15, B37, Cw2

• 源自IgG lambda型多发性骨髓瘤患者；表达免疫球蛋白轻链基因

• RPMI8226细胞对以下病毒敏感：人脊髓灰质炎病毒1、单纯疱疹病毒、痘苗病毒、水疱性口炎病毒；

• 同工酶：G6PD，A
  
  

• 细胞表面标记：

• 阳性：CD28+, CD38+, CD49e+, CD138+

• 阴性：CD19-, CD20-, CD3-, CD5-, CD10-, CD13-, CD34-, CD80-

RPMI8226细胞参数表

RPMI8226人多发性骨髓瘤外周血B淋巴细胞培养教程

RPMI 8226细胞复苏

• 从液氮中取出冻存的RPMI 8226细胞，迅速放入37℃水浴锅中解冻，约1-2分钟。

• 将解冻后的RPMI 8226细胞悬液小心转移到装有9 mL预热培养基的15 mL离心管中。

• 以1000 rpm离心5分钟，弃去上清液。

• 用5 mL新鲜培养基轻轻重悬RPMI 8226细胞。

• 将RPMI 8226细胞悬液转移到25 cm²培养瓶中，并置于37℃、5% CO₂培养箱中培养。

RPMI 8226细胞日常维护

• 每日检查RPMI 8226细胞生长状况，确保无污染（例如，细菌、真菌）。

• 每2-3天更换培养基：

• 将RPMI 8226细胞悬液以1000 rpm离心5分钟。

• 弃去上清，用新鲜预热的培养基重悬RPMI 8226细胞。

• 将RPMI 8226细胞密度调整至2-5 x 10^5 cells/mL。

RPMI 8226细胞传代

• 当RPMI 8226细胞密度达到8-10 x 10^5 cells/mL时，需进行传代。

• 将RPMI 8226细胞悬液离心（1000 rpm，5分钟），弃去上清。

• 用新鲜培养基重悬RPMI 8226细胞。

• 以1:3或1:4的比例稀释RPMI 8226细胞，并转移到新的培养瓶中。

• 调整最终RPMI 8226细胞密度至2-5 x 10^5 cells/mL。

RPMI 8226细胞计数和活力检测

• 取20 μL RPMI 8226细胞悬液，与20 μL 0.4%台盼蓝混合。

• 将混合液置于细胞计数板上，并在显微镜下计数。

• 计算RPMI 8226细胞密度和活力：活力 = (活细胞数/总细胞数) x 100%。

RPMI 8226细胞冻存

• 在对数生长期收集RPMI 8226细胞，并离心后弃去上清。

• 用冻存液（90% FBS + 10% DMSO）重悬RPMI 8226细胞，调整密度至5-10 x 10^6 cells/mL。

• 将1 mL RPMI 8226细胞悬液分装到冻存管中。

• 将冻存管放入程序降温盒中，置于-80℃冰箱中过夜。

• 次日将RPMI 8226细胞冻存管转移到液氮中进行长期保存。

注意事项

• 始终遵循无菌操作规程，以防止RPMI 8226细胞污染。

• 定期观察RPMI 8226细胞形态和生长状态，确保细胞处于对数生长期。

• 适当调整RPMI 8226细胞的培养条件以适应实验需求。

• 避免RPMI 8226细胞过度生长或密度过低。

• 定期进行RPMI 8226细胞特性鉴定，如免疫表型分析，确保细胞系的稳定性和纯度。