MC/CAR（人外周血淋巴细胞）

MC/CAR人外周血淋巴细胞系是由一名81岁患有浆细胞瘤的白人男性的外周血中分离出来的淋巴母细胞样细胞系。尽管其起源于浆细胞瘤患者，但研究表明MCCAR细胞是由EBV（Epstein-Barr virus）转化的B淋巴母细胞系。MCCAR细胞可作为人类融合细胞系使用。

MC/CAR细胞保持正常的雄性二倍体特性。MCCAR细胞系由RittsREJ建立。

MC/CAR人外周血淋巴细胞特性特征

分子和表达特征

• 表达免疫球蛋白，但不分泌

• 无表面免疫球蛋白

• 表达补体（C3b）标记

• 细胞质中存在IgG1和κ轻链

抗原表达

• HLA表达：A1、A33/31、B7、B18、DRw1、DRw2

• CD标记：CD11a+、CD19+、CD20+、CD28-、CD38+

其他特征

• 基因表达：表达免疫球蛋白基因

• 同工酶特征：ADA 1、AK-1 1、ES-D 1、G6PD B、GLO-I 1、PGM1 1、PGM3 1

• 功能特性：产生但不分泌免疫球蛋白、可作为人类融合系、8-氮鸟嘌呤突变体可被克隆或诱变用于HAT敏感培养

• 致瘤性：在裸鼠皮下接种107个细胞可致瘤，21天内100%发展肿瘤

MC/CAR人外周血淋巴细胞参数表

MC/CAR人外周血淋巴细胞培养教程

细胞复苏

• 将含1mL MC/CAR细胞悬液的冻存管在37℃水浴中快速解冻。

• 加入4mL预热的培养基，混合均匀。

• 1000rpm离心3分钟，弃上清。

• 用1-2mL培养基重悬MC/CAR细胞。

• 将MC/CAR细胞悬液转移到含适量培养基的培养瓶或6cm培养皿中。

• 培养过夜，第三天换液并检查MC/CAR细胞密度。

细胞传代

• 推荐传代比例：1:2到1:4

• 当MC/CAR细胞密度达到80-90%时进行传代

• 收集悬浮的MC/CAR细胞，1000rpm离心5分钟。

• 弃上清，用新鲜完全培养基重悬MC/CAR细胞。

• 按1:2到1:4的比例分配到新的培养瓶中。

细胞冻存

• 收集生长状态良好的MC/CAR细胞。

• 1000rpm离心5分钟，弃上清。

• 用冻存液重悬MC/CAR细胞（55%基础培养基 + 40% FBS + 5% DMSO）。

• 将MC/CAR细胞悬液分装到冻存管中。

• 使用程序降温盒或-80℃冰箱缓慢降温。

• 24小时后转移到液氮中长期保存。

注意事项

• MC/CAR细胞是悬浮生长的细胞，不需要使用胰蛋白酶消化。

• 操作过程中保持无菌条件。

• 定期观察MC/CAR细胞形态和生长状态。

• 使用前将培养基、PBS等溶液预热至37℃。

常见问题及解决方法

• 细胞生长缓慢或停滞

• 原因：培养基成分不适、培养条件不合适、MC/CAR细胞密度过低。

• 解决方法：确保使用正确的培养基（IMDM + 20% FBS + 1% P/S），并维持培养温度在37℃，气相为95%空气和5% CO2。确保MC/CAR细胞密度适宜，传代时按1:2到1:4的比例分瓶。

• 细胞污染

• 原因：操作不当、培养基或器皿污染。

• 解决方法：严格遵守无菌操作规程，定期更换培养基，使用经过灭菌处理的培养器皿和培养基。

• 细胞形态异常

• 原因：培养条件不适、MC/CAR细胞老化或污染。

• 解决方法：检查培养条件是否符合要求，确保培养基新鲜和无污染。如怀疑MC/CAR细胞老化，考虑从冻存库中复苏新的细胞。

• 细胞不易传代

• 原因：MC/CAR细胞密度过低或传代方法不当。

• 解决方法：确保MC/CAR细胞达到80-90%密度时进行传代。传代时，收集悬浮的MC/CAR细胞，1000rpm离心5分钟，弃上清后用新鲜培养基重悬细胞。

• 细胞冻存和复苏问题

• 原因：冻存液配制不当、冻存或复苏过程操作不当。

• 解决方法：使用正确的冻存液（55%基础培养基 + 40% FBS + 5% DMSO），确保冻存过程缓慢降温，复苏时快速解冻并迅速加入预热的培养基。

• 细胞致瘤性实验失败

• 原因：MC/CAR细胞状态不佳、接种数量不足。

• 解决方法：确保MC/CAR细胞状态良好，接种足够数量的MC/CAR细胞（10^7个细胞），并严格按照实验操作规程进行。

• 免疫球蛋白表达异常

• 原因：培养条件不适、MC/CAR细胞状态不佳。

• 解决方法：确保培养条件适宜，定期检查MC/CAR细胞状态，必要时调整培养基成分或传代频率。