
TOLEDO细胞(人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞)
- 来源:弥漫大B细胞淋巴瘤
- 细胞特征:悬浮细胞,淋巴母细胞样
- 培养基:1640+10% FBS+1% P/S
- 其他:TOLEDO细胞不表达表面或细胞质免疫球蛋白,且对Epstein-Barr病毒呈阴性
Toledo人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞系(Toledo DLBCL)是一种广泛应用于非霍奇金淋巴瘤研究的重要细胞系。TOLEDO细胞于1990年从一名患有弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的成年女性患者的外周血中分离,患者在经历了高剂量化疗和骨髓移植后,发展为脑部淋巴瘤。尽管Toledo细胞的形态特征类似于伯基特淋巴瘤细胞,但TOLEDO细胞缺乏伯基特淋巴瘤特有的染色体易位,并显示出多种染色体畸变。TOLEDO细胞是研究非霍奇金淋巴瘤及其治疗的宝贵模型。
TOLEDO细胞特性特征
抗原表达: TOLEDO细胞表达CD10、CD19、CD20、CD38,但不表达CD23和CD39。
免疫表型: Toledo细胞不表达表面或细胞质免疫球蛋白。
细胞特性: Toledo细胞在体外培养中呈现出悬浮生长的特性,并且形态上与B淋巴母细胞相似。
TOLEDO细胞缺乏伯基特淋巴瘤的典型染色体易位、表现出多种染色体畸变
TOLEDO细胞对Epstein-Barr病毒(EBV)呈阴性、可用于免疫学研究和3D细胞培养、是研究非霍奇金淋巴瘤的重要模型系统
TOLEDO细胞参数表
细胞名称 | TOLEDO细胞(人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞) |
别名 | Toledo |
来源 | 成年白人女性患者的外周血 |
疾病 | 弥漫性大B细胞淋巴瘤 |
细胞类型 | 肿瘤细胞 |
形态 | 淋巴母细胞样,悬浮生长 |
生物安全等级 | 1 |
致瘤性 | 是 |
EBV状态 | 对Epstein-Barr病毒(EBV)呈阴性 |
抗原表达 | CD10+、CD19+、CD20+、CD38+、CD23-、CD39- |
免疫球蛋白表达 | 不表达表面或细胞质免疫球蛋白 |
染色体特征 | 缺乏伯基特淋巴瘤的典型染色体易位、表现出多种染色体畸变 |
培养基组成 | RPMI-1640 + 20% FBS + 1% P/S |
培养条件 | 37℃,5% CO2,饱和湿度 |
换液周期 | 每2-3天 |
培养基体积 | T25瓶:10-12 ml;10 cm培养皿:12-15 ml |
传代比例 | 1:2至1:4 |
注意事项 | 部分悬浮细胞可能附着于瓶底,轻轻晃动或吹打细胞面即可脱落,不需要胰酶消化。建议使用培养皿培养,更适合吹打细胞操作。 |
冻存液配方 | 92% FBS + 8% DMSO或 92% 完全培养基 + 8% DMSO |
冻存规格 | 200-300万/ml,1ml每管 |
运输方式 | 干冰运输(冻存管),常温运输(T25瓶) |
收到细胞后的处理 | 75%酒精消毒瓶壁,将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3小时;观察细胞状态,确认细胞生长情况。 |
细胞用途 | 免疫学研究,药物筛选:重要的非霍奇金淋巴瘤模型系统 |
培养教程
TOLEDO人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞培养教程
TOLEDO细胞复苏接种
从液氮罐中取出TOLEDO细胞冻存管,迅速在37℃水浴中融化,并轻轻摇晃以加速融化过程。
将融化的TOLEDO细胞悬液转移至含有培养基的离心管中,轻轻混匀后离心(900 rpm,3-5分钟),弃去上清。
加入预热的培养基重悬细胞,轻轻吹打以确保细胞均匀分散。
将细胞悬液均匀分配到T25培养瓶中,推荐接种密度为200-300万/ml。
将培养瓶放置于37℃、5% CO2的培养箱中进行培养。
TOLEDO细胞培养
每2-3天更换一次培养基。轻轻吸去旧培养基,加入新鲜的完全培养基。避免过度吸取细胞,以维持TOLEDO细胞的活性。
当TOLEDO细胞生长至80%汇合时,进行传代。步骤如下:
吸去旧培养基,用PBS洗涤细胞两次。
加入预热的胰酶-EDTA溶液,37℃孵育2-3分钟,使细胞脱落。
加入含血清的培养基终止胰酶作用,轻轻吹打细胞以形成单细胞悬液。
将细胞悬液按1:2至1:4的比例接种到新的培养瓶中,加入预热的培养基。
注意事项
细胞状态:TOLEDO细胞在生长过程中可能会有部分细胞附着于瓶底。轻轻晃动或吹打细胞可帮助其脱落。避免使用胰酶过度消化,以免对细胞造成损伤。
污染防控:在操作过程中使用无菌技术,以防止污染。定期检查培养箱和培养基,保持实验环境的洁净。
细胞冻存:TOLEDO细胞生长良好时,可以进行冻存。使用92% FBS和8% DMSO的冻存液,按照冻存步骤进行操作。
培养基pH值的控制
TOLEDO细胞系在pH值为7.2-7.4的范围内生长最佳。培养基中的碳酸氢盐缓冲系统有助于维持pH值,但细胞代谢产生的乳酸可能导致pH值降低。
定期检测培养基的pH值,适时补加碳酸氢钠溶液,或使用HEPES缓冲系统以维持pH稳定。
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STR鉴定及相关
Amelogenin | X,Y |
CSF1PO | 10,11 |
D1S1656 | 11,12 |
D2S441 | 11.3,14 |
D2S1338 | 19,20 |
D3S1358 | 15,16 |
D5S818 | 11,12 |
D7S820 | 10 |
D8S1179 | 15,16 (ATCC=HB-8065; DSMZ=ACC-180; Technion Genomics Center BCF; PubMed=24116068; PubMed=25877200) |
15,16,17 (CLS=300198) | |
D10S1248 | 13 |
D12S391 | 21,25 |
D13S317 | 9,13 |
D16S539 | 12,13 |
D18S51 | 13,14 |
D19S433 | 15.2 (ATCC=HB-8065; CCRID; CLS=300198; Technion Genomics Center BCF; PubMed=24116068) |
16 (DSMZ=ACC-180) | |
D21S11 | 29,31 |
D22S1045 | 16 |
DYS391 | 12 |
FGA | 22,25 |
Penta D | 9,13 |
Penta E | 15,20 |
TH01 | 9 |
TPOX | 8,9 |
vWA | 17 |