HBL-1细胞（人弥漫大B淋巴瘤细胞）

HBL-1细胞系来源于一名65岁的男性患者，患有艾滋病相关的小非切割细胞淋巴瘤（AIDS-SNCCL），并伴有弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）。HBL-1细胞系是从患者胸腔积液中分离并成功建立的，属于EBV阴性的B细胞淋巴瘤细胞系，呈悬浮生长状态，形态与淋巴母细胞相似。HBL-1细胞在研究AIDS相关非霍奇金淋巴瘤（AIDS-NHL）和DLBCL的生物学特征及潜在治疗方法方面具有重要价值。

HBL-1细胞特性特征

• 表面标记：HBL-1细胞表达表面免疫球蛋白和B细胞限制性标记，显示成熟B细胞的表型，同时存在与SNCCL相关的典型表型特征。
  

• EB病毒感染：HBL-1细胞具有EB病毒的单克隆感染。

• 基因重排：HBL-1细胞显示克隆免疫球蛋白基因重排。
  

• 遗传损伤：与c-myc癌基因激活和p53抑癌基因失活相关的遗传损伤，与AIDS-SNCCL中发现的遗传损伤一致。

• 染色体分析：HBL-1细胞显示染色体畸变，特别是14q+标记染色体之间的易位（如14和16号染色体之间的易位）。

• HBL-1细胞系不仅为研究AIDS相关淋巴瘤提供了一个重要的实验模型，还可以作为HBL-2和HBL-3等克隆的比较模型。
  

HBL-1细胞参数表

HBL-1人弥漫大B淋巴瘤细胞培养教程

HBL-1细胞复苏

• 解冻：将冻存的HBL-1细胞管从液氮中取出，迅速放入37℃水浴中进行解冻，轻轻摇晃使HBL-1细胞冻存液均匀融化，但避免水浴口水进入冻存管。解冻时间控制在1-2分钟。

• 混合培养基：解冻后，迅速将HBL-1细胞悬液转移至含有5 mL DMEM培养基（含10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素-链霉素（PS））的离心管中，轻轻混匀。

• 离心：以1000 RPM（相对离心力约200g）离心5分钟，弃去上清液。

• 重悬细胞：向细胞沉淀中加入1-2 mL新鲜培养基，轻轻吹打，使HBL-1细胞充分悬浮。

• 培养：将HBL-1细胞悬液转移至6 cm培养皿或T25培养瓶，补充至6-8 mL DMEM完全培养基，置于37℃、5% CO₂的培养箱中培养过夜。

HBL-1细胞状态检查与培养基更换

• 检查细胞状态：第二天观察HBL-1细胞形态，检查是否有大量悬浮或贴壁HBL-1细胞。

• 更换培养基：若有较多漂浮细胞和碎片，可通过更换培养基清除死HBL-1细胞及代谢废物。保留一定比例的原培养基，以保留较活跃的HBL-1细胞群体。

HBL-1细胞传代

• 当HBL-1细胞密度达到80%-90%时，应进行传代操作。以下两种方法可供选择：

• 方法一：全量换液

• 收集细胞：将培养瓶中的HBL-1细胞培养液全部吸出并转移至离心管中。

• 离心：在1000 RPM下离心5分钟，弃去上清液。

• 重悬细胞：加入1-2 mL新鲜培养基，轻轻吹打使HBL-1细胞悬浮。

• 分瓶：将HBL-1细胞悬液按1:2至1:4比例分配至新的培养瓶中，加入8 mL培养基继续培养。

• 方法二：半量换液

• 弃去部分培养基：从原培养瓶中弃去一半培养基，保留剩余的HBL-1细胞悬液。

• 分瓶：将剩余的HBL-1细胞悬液按1:2至1:3的比例分配至新的培养瓶中，补充新鲜培养基至8 mL，总体积充足后继续培养。

HBL-1细胞冻存

• 当HBL-1细胞状态良好并达到适当密度时，应进行细胞冻存操作以便于长期保存。

• 收集细胞：将培养瓶中的HBL-1细胞连同培养基一起转移至离心管中，以1000 RPM离心4分钟，弃去上清液。

• 清洗：用无钙镁的PBS缓冲液清洗一次，以去除残留的培养基和代谢物。

• 细胞计数：使用血球计数板或自动细胞计数仪计算HBL-1细胞数，调整细胞浓度至5×10⁶至1×10⁷个细胞/mL。

• 冻存液准备：制备90%胎牛血清和10% DMSO的冻存液，按1 mL的体积加入每个冻存管中，确保均匀混合HBL-1细胞。

• 冻存：将冻存管置于程序降温盒内，放入-80℃冰箱中冷冻24小时后，移入液氮罐中进行长期保存。