
DoHH2细胞系(人B细胞淋巴瘤细胞系)
- 来源:胸腔积液
- 细胞特征:悬浮细胞,淋巴细胞样
- 培养基:RPMI-1640+10% FBS+1% P/S
- 其他:DoHH2细胞系表达BCL2 mRNA,BCL2蛋白与细胞凋亡的抑制有关
DOHH2细胞系来源于一名患有难治性免疫母细胞型B细胞淋巴瘤的60岁男性患者,其原发病为滤泡性中心母细胞型/中心细胞淋巴瘤,后期病情进展为胸腔积液。DOHH2细胞系携带t(14;18)染色体易位,形成IGH-BCL2融合基因,并能够表达BCL2 mRNA。原始培养物是EBV-和EBV+细胞的混合物,其中EBV-细胞被分离并克隆扩增。外显子组和RNA序列数据可用(见参考18187和外显子序列和RNA-Seq)。
DOHH2细胞系为悬浮生长的淋巴母细胞样细胞,DOHH2细胞系常用于研究弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的病理机制。特别适合研究由于IGH-BCL2易位导致的BCL2基因过表达,这与DLBCL的抗凋亡特性密切相关。
DoHH2细胞系参数表
细胞名称 | DoHH2细胞系(人B细胞淋巴瘤细胞系) |
别名 | DOHH2; DoHH-2; DOHH-2 |
年龄/性别 | 60岁/男性 |
组织来源 | 胸腔积液 |
疾病特征 | 难治性免疫母细胞型B细胞淋巴瘤 |
细胞类型 | 肿瘤细胞 |
形态学 | 淋巴母细胞样 |
生物安全等级 | BSL-1 |
基因易位 | t(14;18)导致IGH-BCL2融合基因 |
基因表达 | 表达BCL2 mRNA |
EB病毒状态 | 原始培养物为EBV阳性和阴性细胞混合,分离后获得EBV阴性细胞 |
培养基 | RPMI-1640 + 10% FBS + 1% P/S |
生长条件 | 95%空气 + 5% CO₂, 温度37℃ |
推荐传代比例 | 1:2至1:6 |
推荐换液频率 | 每周2-3次 |
倍增时间 | ~40小时 |
冻存液 | 90% 完全培养基 + 10% DMSO |
冻存条件 | 液氮储存 |
支原体检测 | 阴性 |
保藏机构 | DSMZ; ACC-47 |
应用领域 | B细胞淋巴瘤的病理机制研究、药物筛选等 |
培养教程
DoHH2人B细胞淋巴瘤细胞系培养教程
DoHH2细胞复苏
从液氮中取出DoHH2细胞冻存管,迅速在37℃水浴中解冻,期间轻轻摇动以加速解冻。
解冻完成后,将细胞悬液缓慢加入4 mL新鲜的完全培养基中,并轻轻混匀。
以1000 RPM离心4分钟,去除上清液,保留细胞沉淀。
用1-2 mL新鲜培养基重悬细胞,随后将DoHH2细胞悬液转移至培养瓶中。
将培养瓶放入37℃培养箱中,静置过夜,以便细胞适应生长环境。
日常维护与传代
换液频率:每2-3天进行一次换液。方法为轻轻吸去一部分旧培养基,补充新鲜培养基,确保DoHH2细胞始终处于健康的生长环境中。
传代操作:当DoHH2细胞密度达到80%-90%时,进行传代操作。
将细胞培养液轻轻吸出并离心沉淀细胞。
重悬DoHH2细胞于新鲜培养基中,按比例(1:2至1:6)分装到新的培养瓶中。
转入培养箱继续培养。
DoHH2细胞冻存
冻存培养基配方为90%完全培养基 + 10%二甲基亚砜(DMSO)。
将DoHH2细胞悬液分装至冻存管,逐步降低温度至-80°C,最后转移至液氮中长期保存。
按照前述复苏步骤操作,将DoHH2细胞快速解冻并重新培养。
注意事项
无菌操作:整个培养过程中需严格遵守无菌技术,防止细胞污染。操作时尽量使用无菌工具,定期检查培养环境及设备。
污染监控:每天观察DoHH2细胞形态和培养基的澄清度。如发现培养基浑浊或细胞形态异常,应及时采取措施处理。
健康监测:DoHH2细胞为悬浮生长细胞,定期监测细胞生长状态,避免细胞过度密集导致营养耗尽。此外,注意检查悬浮细胞的均匀性,确保细胞分布一致。
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STR鉴定及相关
Amelogenin | X,Y |
CSF1PO | 11,12 |
D2S1338 | 22,24 |
D3S1358 | 15,17 |
D5S818 | 11,12 |
D7S820 | 11 |
D8S1179 | 13,16 |
D13S317 | 12,13 |
D16S539 | 11,14 |
D18S51 | 11,14 |
D19S433 | 14.2,15.2 |
D21S11 | 30 |
FGA | 21,27 |
Penta D | 9,12 |
Penta E | 12,16 |
TH01 | 9 |
TPOX | 8,11 |
vWA | 14,19 |
参考文献
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