Mino细胞（人外周血套细胞淋巴瘤细胞）

Mino细胞是从一名64岁白人男性患者的外周血中分离出的套细胞淋巴瘤（Mantle Cell Lymphoma, MCL）细胞系。该患者被诊断为复发型MCL，Mino细胞系的建立为套细胞淋巴瘤的研究提供了重要的工具，尤其在免疫学和癌症研究中具有广泛应用。

Mino细胞起源于外周血单核细胞（PBMCs），具有淋巴母细胞的特征，在体外可以以悬浮状态单独或成簇生长。Mino细胞为超三倍体，染色体数为74，且存在特定染色体异常，例如t(11;14)易位和del(6)(q16)等。此细胞系的关键肿瘤抑制基因如p53、p16 (INK4a)和p21 (WAF1)均有表达。mino细胞使研究人员能够更深入地探讨MCL的分子机制，特别是在细胞周期调控和肿瘤抑制相关基因方面的变化，有助于推动对该疾病的潜在治疗策略的发展。

Mino细胞特性特征

• 形态：Mino细胞呈淋巴母细胞形态，通常较大，可以在体外以悬浮方式生长，也可以成簇生长。
  

• 生长方式：mino细胞系能够在培养基中以悬浮状态生长，适合进行各种实验研究。

• 免疫表型：流式细胞术检测显示：CD3-、CD5+、CD10-、CD19+、CD20+、CD23-（在ATCC验证）

• 基因表达：细胞周期蛋白D2；细胞周期蛋白D3；p53；p16基因（INK4a）；p21（WAF1）

• Western印迹还表明细胞周期蛋白D1的表达，而D2和D3的表达较弱或未检测到。

• 视网膜母细胞瘤蛋白主要被磷酸化。
  

Mino细胞参数表

Mino人外周血套细胞淋巴瘤细胞培养教程

收到细胞后的处理

• 检查包装：收到Mino细胞后，首先检查冻存管是否完整，确认无漏液现象。如发现漏液，请拍照记录并联系供应商。

• 显微镜观察：将T25培养瓶去掉封口膜，置于37℃培养约2-3小时，以便Mino细胞恢复生长。使用显微镜观察细胞的状态，确保Mino细胞活性良好。

复苏Mino细胞

• 解冻细胞：将冻存管中的1mL Mino细胞悬液迅速放入37℃水浴中解冻，摇晃均匀混合。

• 加入4mL的培养基并混合均匀。
  

• 在1000 RPM条件下离心4分钟，弃去上清液。

• 补加1-2mL新鲜培养基，轻轻吹匀。

• 接种：将Mino细胞悬液转移至培养瓶中，或将其加入10cm培养皿中，添加约8mL培养基，培养过夜以促使细胞附着和生长。

检查Mino细胞状态

• 第二天更换培养基，并检查Mino细胞的密度。若细胞密度达到80%-90%，即可进行传代。

细胞传代

• 清洗：弃去培养上清液，使用不含钙、镁离子的PBS轻洗Mino细胞1-2次。

• 加入1mL消化液（0.25%胰蛋白酶和0.53mM EDTA），放入37℃培养箱消化1-2分钟。

• 在显微镜下观察消化情况，若Mino细胞大部分变圆并脱落，迅速取回操作台，轻轻敲击培养瓶并加入培养基以终止消化。

• 在每瓶补加6-8mL培养基，轻轻打匀后吸出，在1000 RPM条件下离心4分钟，弃去上清液。

• 补加1-2mL新鲜培养基并轻轻吹匀。

• 分配：将Mino细胞悬液以1:2的比例分配到新的培养皿或瓶中，每个新皿中加入8mL培养基。

Mino细胞冻存

• 当Mino细胞状态良好时，弃去培养基并用PBS清洗细胞。
  

• 加入1mL胰蛋白酶，待Mino细胞变圆并脱落后，加入1mL含血清的培养基以终止消化，并使用血球计数板计数细胞。

• 在1000 RPM条件下离心4分钟，弃去上清液。
  

• 加入1mL血清重悬Mino细胞，根据细胞数量加入DMSO，使其终浓度为10%。确保每支冻存管的Mino细胞密度不低于1x10^6/mL，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，并做好标识。

• 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80℃冰箱保存2小时，然后转入液氮中长期储存。记录冻存管的位置以便后续取用。