HS-5细胞（人骨髓基质细胞）

HS-5人骨髓基质细胞是一种源自一名30岁白人男性骨髓基质的细胞系，呈现典型的成纤维细胞形态。HS-5细胞系通过使用表达 HPV-16 E6/E7 蛋白的逆转录病毒载体（LXSN16E6E7）进行转化，转化过程中使用了聚乙烯吡咯烷酮（polybrene）来增强感染效率。通过这一技术，HS-5细胞具备永生化特性，并可支持造血祖细胞的增殖，即便在无外源性因子的血清剥夺培养基中共培养时依然能够实现。
HS-5细胞的转化过程最终筛选出27个不死化克隆，分别编号为 HS-1 到 HS-27，HS-5 被选定为主要研究对象。

HS-5细胞特性特征

• 分子特征：HS-5细胞通过转化技术获得，使用了HPV-16 E6/E7基因表达来实现永生化。HS-5细胞能够在无外源因子的血清剥夺培养基中支持造血祖细胞的增殖。

• 基因表达：粒细胞集落刺激因子（G-CSF）、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）、试剂盒配体（KL）、巨噬细胞抑制蛋白-1α

• 白细胞介素家族：IL-1α、IL-1β、IL-1RA、IL-6、IL-8、IL-11、白血病抑制因子

• HS-5细胞是多能性骨髓基质细胞，能够分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞及其他类型的结缔组织细胞，且在细胞培养中以贴壁方式生长。
  

HS-5细胞参数表

HS-5人骨髓基质细胞培养教程

HS5细胞复苏

• 预热完全培养基：将DMEM完全培养基在37°C水浴中预热，以确保HS5细胞复苏时的环境适宜。
  

• 快速化冻：从液氮罐或-80°C冰箱中取出冻存的HS5细胞，迅速放入37°C的水浴中，使细胞悬液快速化冻，通常需要约1-2分钟。注意避免HS5细胞长时间暴露于高温中。

• 离心清洗：将解冻后的HS5细胞移入15 ml离心管，加入5 ml预热的完全培养基混匀后，以1000 rpm离心5分钟，去除冷冻保存液。

• 重悬HS5细胞：弃去上清后，加入2 ml完全培养基轻轻重悬HS5细胞。

• 接种培养：将重悬后的HS5细胞转移至T25培养瓶中，加入适量完全培养基，并放入37°C、5% CO₂培养箱中进行培养。

• 观察贴壁情况：HS5细胞通常在24小时内完成贴壁。若HS5细胞未能贴壁，可能是由于细胞损伤或死亡。

HS5细胞传代

• 观察HS5细胞状态：待HS5细胞生长至80%-90%汇合时进行传代操作。
  

• 冲洗细胞：吸除旧培养基，加入2 ml PBS轻轻冲洗HS5细胞，去除残留培养基和血清中的杂质。

• 消化HS5细胞：加入1 ml 0.25%胰蛋白酶，轻轻晃动培养瓶，确保胰蛋白酶覆盖HS5细胞表面。将培养瓶放回37°C培养箱中消化1-2分钟，观察HS5细胞收缩和变圆。

• 终止消化：当HS5细胞开始脱离瓶壁时，加入3 ml预热的含FBS的完全培养基终止胰蛋白酶的作用。

• 细胞收集：将HS5细胞悬液转移至15 ml离心管中，以1200 rpm离心3分钟，弃去上清。

• 重悬与接种：用适量完全培养基重悬HS5细胞，根据细胞密度需求以1:3至1:5的比例进行接种，并补充完全培养基。

HS5细胞冻存

• 收集HS5细胞：按传代步骤进行HS5细胞的消化和离心收集，将所得HS5细胞沉淀重悬于少量完全培养基中。
  

• 细胞计数：取少量HS5细胞进行计数，确保冻存细胞的密度为1 x 10⁶ 个/ml。

• 准备冻存液：将HS5细胞重悬于预冷冻存液中，混合均匀后立即转入冻存管中。

• 程序冻存：将装有HS5细胞的冻存管放入程序冻存盒中，缓慢降温至-80°C，过夜后转移至液氮罐中长期保存。