DLD-1细胞（人结直肠腺癌上皮细胞）

DLD-1细胞源自结直肠腺癌的假二倍体人类细胞系，最初从一名结肠腺癌患者的大肠组织中分离获得，常用于癌症研究，特别是在转染实验中作为合适的宿主。

DLD-1细胞系具有46条染色体的模式核型，其中86%的细胞保持这一核型。多倍体细胞的比例约为17.1%。其核型特征包括46, XY, -2, +dir dup(2)(p13-p23)，其中Y染色体相对于N22染色体稍长，并在远端q臂存在明显的异色荧光区。

DLD-1细胞是已被鉴定为来源于单个个体的四种结直肠腺癌细胞系之一。DNA图谱研究表明，DLD-1xb、HCT-15细胞、HCT-8细胞和HRT-18G细胞共享一个图谱。

DLD-1细胞特性特征

• 致瘤性：DLD-1细胞在裸小鼠中进行皮下接种（10^7个细胞），21天内100%（5/5）出现肿瘤，显示出良好的致瘤性。

• 癌基因表达：DLD-1细胞对多种癌基因呈阳性反应，myc+；myb+；ras+；fos+；sis+；abl-；ros；src-。p53抗原表达呈阳性，且其突变形式为C→T点突变，导致241位的Ser→Phe变化。

• 抗原表达：DLD-1细胞表达O型血抗原，对角蛋白和波形蛋白呈弱阳性反应，角蛋白免疫过氧化物酶染色结果为阳性。

• 基因表达：该细胞系中癌胚抗原（CEA）表达为0.5 ng/10^6个细胞/10天，结肠抗原3表达。

• 同工酶特征：DLD-1细胞的同工酶谱包括ES-D（1-2）、G6PD（B）、PEP-D（1）、PGD（A）、PGM1（1）和PGM3（1）。

• 细胞遗传学：DLD-1细胞与HCT-15细胞在DNA指纹鉴定和染色体组型分析中显示出相似性，表明它们可能源自同一患者的不同克隆。尽管遗传起源得到证实，但它们在染色体标记上并无一致性改变。
  

• 污染与处理：1979年DLD-1细胞曾被猪鼻支原体污染，经过12周的抗生素联合培养处理后，细胞检测结果在连续11个月的无抗生素培养中均为阴性

DLD-1人结直肠腺癌上皮细胞参数表

DLD-1人结直肠腺癌上皮细胞培养教程

DLD1细胞复苏

• 将水浴锅预热至37℃，准备用于复苏DLD1细胞的完全培养基（RPMI-1640，补充10%胎牛血清和1%青霉素/链霉素）。
  

• 从液氮中取出冷冻的DLD1细胞管，迅速放入37℃的水浴中，轻轻摇动1-2分钟，直至DLD1细胞完全融化。
  

• 将融化后的DLD1细胞迅速转移至无菌的15 mL离心管中，并加入9 mL预热的完全培养基，轻轻混匀。

• 以1000 rpm离心5分钟，弃去上清液。

• 用1-2 mL的完全培养基重悬DLD1细胞，并将细胞悬液转移至T-25培养瓶中。
  

• 将培养瓶放入37℃、5% CO₂培养箱中孵育2-3小时，以使DLD1细胞恢复并贴壁。

DLD1细胞培养

• 培养基：RPMI-1640培养基，补充10%胎牛血清和1%青霉素/链霉素，用于DLD1细胞的培养。

• 培养条件：在37℃、5% CO₂、95%湿度的条件下培养DLD1细胞。

• 换液频率：每2-3天更换一次培养基，以确保DLD1细胞的培养环境清洁并支持其健康生长。

• DLD1细胞观察：定期显微镜下观察DLD1细胞的形态和生长状态，确认DLD1细胞无污染，生长状况良好。

DLD1细胞传代

• 当DLD1细胞达到80-90%的融合度时，应进行传代，以避免DLD1细胞过度拥挤。
  

• 取出DLD1细胞培养瓶，弃去培养基，加入1-2 mL 0.25%胰酶溶液，覆盖DLD1细胞，置于37℃培养箱中消化2-3分钟，直至DLD1细胞变圆且开始脱落。
  

• 轻轻敲击培养瓶底部，确保所有DLD1细胞均已脱离瓶壁。

• 加入等体积的完全培养基中和胰酶，轻轻混匀DLD1细胞悬液。
  

• 以1000 rpm离心5分钟，弃去上清液。
  

• 将DLD1细胞用适量的完全培养基重悬。

• 按1:3至1:4的比例将DLD1细胞悬液分装至新的培养瓶中，添加适量的完全培养基。
  

• 将新培养瓶置于培养箱中，继续培养DLD1细胞。

DLD1细胞冻存

• 配制DLD1细胞的冻存液，成分为：55%完全培养基、40%胎牛血清和5%二甲基亚砜（DMSO）。
  

• 将DLD1细胞以1000 rpm离心5分钟，弃去上清液。
  

• 将DLD1细胞重悬在预先准备好的冻存液中，混匀。
  

• 将重悬好的DLD1细胞分装至冻存管中，并清晰标记DLD1细胞类型、传代次数及冻存日期。
  

• 将冻存管先置于-80℃冰箱中过夜，随后移入液氮罐中长期保存DLD1细胞。
  

注意事项

• DLD1细胞的冻存和复苏过程应严格保持无菌操作，以避免细胞污染。

• 培养DLD1细胞的培养基使用前需新鲜配制，已用于细胞复苏或培养的培养基不应再次使用。

• 定期监测DLD1细胞状态，确保其无污染并生长良好。