MKN74细胞（人胃癌细胞）

MKN74 是一种人胃癌细胞系，最初由日本国立癌症研究所从一名37岁男性患者的肝转移病灶中分离，患者罹患的是中分化管状腺癌。MKN74细胞具有与肠道分化相关的形态学特征，包括在体外及裸鼠模型中观察到的细胞极性和具有核心丝的微绒毛。
MKN74细胞在形态上表现为上皮样细胞，具有慢生长特性。最初呈现为近二倍体，在多代传代培养后，染色体数量发生了变化。MKN74细胞来自日本细胞资源中心（JCRB），可用于胃癌发病机制研究和胃癌干细胞研究。

MKN74细胞特性特征

• p53基因状态：MKN74细胞通常具有野生型p53，但一些报告表明p53基因中存在点突变（I251L）、RUNX3 mRNA表达缺失。

• SNCG基因表达：MKN74细胞表达突触核蛋白γ（SNCG）基因，该基因已被证明能刺激癌症细胞增殖和转移。

• MKN74细胞通过无血清悬浮培养可获得肿瘤细胞球。

• MKN74细胞曾经感染支原体并通过MC-210消除支原体

• MKN74细胞对EBV、HBV、HIV-1和HIV-2均为阴性
  

MKN74细胞参数表

MKN74人胃癌细胞培养教程

MKN74细胞复苏

• 从液氮中取出冻存的MKN74细胞冻存管，迅速将其置于37℃的水浴中摇晃解冻，解冻过程应在1-2分钟内完成。
  

• 解冻后，立即向冻存管中加入4 mL预温的完全培养基，轻轻混匀以确保MKN74细胞均匀分布。

• 将MKN74细胞悬液在1000 RPM下离心4分钟，弃去上清液。

• 补加1-2 mL培养基，充分混匀后将MKN74细胞悬液转移至培养瓶中，加入适量培养基（约8 mL），并将培养瓶置于37℃、5% CO₂培养箱中培养过夜。

• 第二天更换新鲜培养基，并检查MKN74细胞的生长状态和密度。

MKN74细胞传代

• 当MKN74细胞覆盖培养瓶或培养皿底面积的80%-90%时，可以进行传代操作。
  

• 弃去培养基，用无钙镁的PBS缓冲液轻轻洗涤MKN74细胞1-2次，以去除残留的血清成分。
  

• 加入1 mL 0.25%胰蛋白酶-0.53 mM EDTA消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，期间使用显微镜观察MKN74细胞的消化进程。

• 当MKN74细胞大部分变圆且脱落时，迅速将培养瓶取回操作台，轻敲培养瓶几下以帮助MKN74细胞完全脱离。

• 加入少量预温的培养基中和胰蛋白酶，然后将MKN74细胞悬液轻轻混匀。

• 在1000 RPM下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2 mL培养基后重新悬浮MKN74细胞。

• 按1:2的比例将MKN74细胞悬液分至新的培养瓶中，并补充8 mL新鲜培养基，继续培养。

MKN74细胞冻存

• 当MKN74细胞生长状态良好，且密度适宜时，可进行冻存操作。
  

• 弃去培养瓶中的培养基，用PBS洗涤一次后，加入1 mL胰蛋白酶消化MKN74细胞。
  

• 当MKN74细胞变圆脱落后，加入1 mL含血清的培养基终止消化。

• 使用血球计数板计数MKN74细胞数量，确保细胞密度不低于1×10⁶ cells/mL。

• 以1000 RPM离心4分钟，弃去上清液，加入1 mL血清重悬MKN74细胞，根据细胞数量加入适量的血清和DMSO，使DMSO的终浓度达到10%。

• 将1 mL MKN74细胞悬液分装到冻存管中，做好标记。

• 将冻存管放置于程序降温盒中，置于-80℃冰箱中预冻约2小时后，再转入液氮罐中长期保存。