WERI-Rb-1细胞（人视网膜神经胶质瘤细胞）

WERI-Rb-1细胞系是来源于一名1岁女性患者视网膜母细胞瘤组织的人类视网膜神经胶质瘤细胞。WERI-RB-1细胞系由R.M. McFall和T.W. Sery于1974年建立，并由美国细胞库（ATCC）保存。

WERI-Rb-1细胞系的染色体接近二倍体，模式染色体数目为47，出现率为38%，并且多倍体细胞占9%。WERI-RB-1细胞系具有15到16条标记染色体，包括以下重排：t(1, ?), t(3p, 5q), der(3)t(?q29; ?), t(3q, ?), 5q+, i(6p), t(7q, ?), 9q+, t(10q, 21q), 16q+，以及其他五到六个标记染色体。正常的3号、10号、13号和16号染色体缺失，X染色体存在两个拷贝，而在QM染色制剂中未检测到Y染色体。

WERI-Rb-1细胞系因其独特的形态和遗传特征，广泛用于视网膜母细胞瘤的研究，也是研究基因转染的理想宿主细胞系。

WERI-Rb-1细胞特性特征

• WERI-RB-1细胞呈圆形，通常聚集成葡萄状的细胞簇。

• 致瘤性：WERI-RB-1细胞具有致瘤性。

• 同工酶：ES-D，1；G6PD，B；GLO-I，2；Me-2，1；PGM1，1；PGM3，0。

• 电镜观察：扫描电镜显示，WERI-Rb-1细胞表面有囊泡、片足和微绒毛，且这些结构在数量和频率上存在变化。
  

• 培养特性：在Difco Bacto琼脂中培养后，WERI-Rb-1细胞能够存活但不形成菌落

WERI-Rb-1细胞参数表

WERI-Rb-1人视网膜神经胶质瘤细胞培养教程

WERI-Rb1细胞复苏

• 将水浴预热至37℃。
  

• 准备一个含有4-6mL完全培养基（RPMI-1640培养基，添加10% FBS和1%双抗）的离心管。

• 将含有1mLWERI-Rb1细胞悬液的冻存管在37℃水浴中快速解冻（约1-2分钟），确保盖紧闭。
  

• 解冻后立即用75%酒精消毒冻存管外表面。

• 将解冻后的WERI-Rb1细胞悬液转移到准备好的离心管中，轻轻混合。
  

• 在1000RPM条件下离心3-5分钟，弃去上清液。

• 加入1-2mL完全培养基，轻轻吹打混匀WERI-Rb1细胞。

• 将WERI-Rb1细胞悬液接种到新的培养瓶（如T25瓶）或培养皿（如10cm皿）中，加入约8mL完全培养基。
  

• 将培养瓶放置于37℃、5% CO₂的培养箱中过夜培养。

• 次日换液，检查WERI-Rb1细胞密度和状态。
  

WERI-Rb1细胞传代

• 传代准备：传代前准备好无钙镁离子的PBS和消化液（0.25% Trypsin-0.53mM EDTA）。

• 当WERI-Rb1细胞密度达到80%-90%时进行传代。
  

• 弃去培养上清，用PBS润洗WERI-Rb1细胞1-2次。

• 加1mL消化液至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟。

• 在显微镜下观察，WERI-Rb1细胞大部分变圆并脱落时，迅速终止消化，加少量培养基。

• 加6-8mL培养基轻轻混匀，在1000RPM离心4分钟，弃去上清液，重悬于1-2mL培养基。

• 将WERI-Rb1细胞悬液按1:2比例分到新的含8mL培养基的培养瓶或培养皿中。

WERI-Rb1细胞冻存

• 冻存准备：准备冻存液（90%血清，10% DMSO），现用现配。

• 预冷冻存管。

• WERI-Rb1细胞状态良好时，弃去上清，用PBS润洗1-2次。
  

• 加1mL消化液消化1-2分钟，终止消化后离心收集WERI-Rb1细胞。

• 将WERI-Rb1细胞重悬于冻存液中，密度为1x10⁶/mL。

• 分装至冻存管，每管1mL。

• 将冻存管置于程序降温盒中，以-1℃/分钟降温至-80℃，然后转移至液氮中长期保存。

优化和注意事项

• 传代时机选择：在WERI-Rb1细胞密度达到80%-90%时进行传代，以维持细胞活力；避免过度生长或过低密度。

• 传代比例调整：初次传代建议采用1:2比例，根据WERI-Rb1细胞生长情况，调整至1:2到1:5之间。

• 离心参数优化：使用1000RPM的离心速度，时间为3-5分钟，以收集WERI-Rb1细胞而不损伤。

• 培养基选择和更换：使用RPMI-1640培养基，添加10% FBS和1%双抗；定期更换培养基，保持WERI-Rb1细胞生长环境新鲜。

• 无菌操作：严格遵循无菌操作，减少污染风险；使用75%酒精消毒操作台面和器具。

• 细胞状态记录：在收到WERI-Rb1细胞后的前3天拍摄照片，记录状态。

• 悬浮细胞处理：由于WERI-Rb1细胞为悬浮细胞，传代时需要离心收集细胞；可采用半数换液方式，按1:2到1:3比例分配。

• 环境条件控制：维持WERI-Rb1细胞的培养环境在37℃，5% CO₂条件下；确保培养箱温度和气体浓度稳定。