AMC-HN-8 细胞系（人喉鳞状细胞癌细胞系）

AMC-HN-8细胞是一种人源喉鳞状细胞癌细胞系，Cellosaurus 登记编号为 CVCL_5966。AMC-HN-8细胞系由韩国牙山医学中心研究团队于1996年前后建立，来源于一名46岁韩国男性喉鳞状细胞癌患者的淋巴结转移组织。

AMC-HN-8细胞主要呈贴壁生长，细胞排列形成上皮样单层结构。通过裸鼠移植瘤实验及组织学检测；同时利用流式细胞术和间接免疫荧光技术，检测了细胞 DNA 含量、整合素亚单位 α6、β1、β4 以及细胞间黏附分子 ICAM-1 的表达情况。其中，β4 整合素亚单位表现出较为突出的高表达特征，是 AMC-HN 系列细胞的重要生物学特征之一。

AMC-HN-8细胞具有明确的喉鳞状细胞癌来源及相应的分子表型，是头颈部鳞状细胞癌研究的体外细胞模型，适用于肿瘤细胞增殖、黏附、整合素介导的细胞相互作用以及肿瘤相关分子机制等方面的研究。使用时应注意区分其原发肿瘤部位（喉）与实际取材部位（淋巴结转移灶），以保证细胞来源信息的准确性。

amc-hn-8细胞特性特征

• 形态特征：贴壁生长，呈上皮样单层形态。

• 整合素 β4：原始研究中表达极高，是 AMC-HN-8 的突出表达特征；该结论来自 AMC-HN 系列内的比较。

• 整合素 α6、β1：均有表达

• TP53 基因变异：携带 p.Gly293del（c.877_879delGGG）框内缺失，即 p53 蛋白第 293 位甘氨酸缺失；合子状态未明确，不属于 TP53 野生型。

• JAB1/CSN5 表达：研究报道其蛋白水平高于正常人口腔黏膜上皮细胞（OME）对照

• JAB1 敲低响应：增殖下降、凋亡增加，伴随 p-AKT 下降，以及 p53、裂解型 caspase-3 升高。

• DIAPH1 敲低响应：凋亡增加，伴随 ATR、p-p53（Ser15）、BAX 及裂解型 caspase-3、-8、-9 升高。

• 药物响应：一项研究中，72 小时处理条件下，对不超过 0.5 μM 的 HSP90 抑制剂 17AAG 生长抑制反应较弱；不能泛化为普遍耐药。

• 尚未明确的特征：现有基础资料不足以确定该株的 ICAM-1 表达、具体 DNA 倍体、HPV/p16 状态及 PD-L1 表达水平。

• 使用边界：JAB1、DIAPH1 敲低后的分子变化属于实验响应，不应写成未经处理细胞的固定基础特征。

amc-hn-8细胞（人喉鳞状细胞癌）参数表

amc-hn-8细胞（人喉鳞状细胞癌）培养教程

AMC-HN-8细胞复苏

• 复苏前准备

• 提前准备 AMC-HN-8细胞专用完全培养基，并置于37℃水浴中预温。

• 准备无菌离心管、T25培养瓶、移液器及相关无菌耗材。

• 培养箱提前调整至37℃、5% CO₂，并确保湿度适宜。

• 在T25培养瓶中预先加入适量完全培养基，备用。

• 细胞快速解冻

• 从液氮或其他低温储存条件中取出 AMC-HN-8细胞冻存管，立即进行复苏。

• 将冻存管置于37℃水浴中，轻轻晃动，使冻存细胞快速融化。

• 通常约1～2分钟完成解冻，以冻存液中残留少量冰晶刚好消失为宜。

• 取出冻存管，用75%酒精或实验室规定的消毒剂擦拭管外壁，随后转入生物安全柜进行无菌操作。

• 细胞稀释与离心

• 在无菌离心管中预先加入9 mL预温的完全培养基。

• 将解冻后的 AMC-HN-8细胞悬液缓慢转入离心管中，轻轻混匀。

• 以125 ×g离心10分钟，去除含有冻存保护剂的上清液。

• 小心弃去上清，避免损失细胞沉淀。

• 加入1～2 mL完全培养基，轻柔吹打，使细胞均匀分散。

• 接种与恢复培养

• 将细胞悬液接种至预先准备好的T25培养瓶中。

• 根据培养瓶内细胞悬液的体积及细胞密度，补充适量完全培养基。

• 轻轻前后、左右晃动培养瓶，使 AMC-HN-8细胞均匀分布于培养瓶底部。

• 将培养瓶放入37℃、5% CO₂培养箱中进行恢复培养。

• 复苏约24小时后，在显微镜下观察细胞贴壁情况、形态及漂浮细胞数量，必要时进行换液。

• 复苏后培养注意事项

• AMC-HN-8细胞复苏时，应尽量缩短细胞在冻存状态与室温之间的过渡时间。

• 离心及重悬操作应轻柔，避免机械损伤。

• 初次复苏后，细胞可能存在一定数量的漂浮细胞，应结合后续贴壁及增殖情况判断恢复状态。

• 细胞恢复稳定后，可根据生长情况安排传代，日常培养建议每周换液2～3次。

AMC-HN-8细胞传代

T25培养瓶传代步骤

• （1）弃去旧培养基

• 吸除培养瓶中的旧培养液，操作时避免吸头直接接触或刮擦细胞层。

• （2）PBS清洗

• 加入约2 mL无钙、无镁PBS，轻轻晃动培养瓶，使PBS覆盖整个细胞生长面，随后吸除PBS，以减少残留培养基对胰蛋白酶消化的影响。

• （3）胰蛋白酶消化

• 加入约1 mL 0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，使其充分覆盖细胞层。将培养瓶置于37℃环境中消化，参考时间为4～5分钟，并通过显微镜观察 AMC-HN-8细胞状态。

• 当细胞逐渐收缩、变圆并开始脱落时，即可终止消化，不应单纯依靠固定时间判断消化终点。

• （4）终止消化

• 加入约3 mL完全培养基，轻柔吹打培养瓶底部，使脱落细胞形成均匀悬液。

• （5）收集细胞

• 将细胞悬液转移至无菌离心管中，以250 ×g离心3分钟，弃去上清液，保留细胞沉淀。

• （6）重悬细胞

• 加入适量新鲜完全培养基，轻柔吹打，使 AMC-HN-8细胞充分分散，尽量减少细胞团块。

• （7）分瓶接种

• 按照1:2～1:4的比例进行分瓶，将细胞悬液接种至加入适量完全培养基的新T25培养瓶中。

• （8）继续培养

• 轻轻晃动培养瓶，使细胞均匀分布，随后放入37℃、5% CO₂培养箱中继续培养。次日观察细胞贴壁情况，并根据细胞生长状态安排后续换液及传代。

• 传代操作注意事项

• AMC-HN-8细胞消化过程中应密切观察细胞形态，以细胞开始脱落作为终止消化的主要依据。

• 避免长时间消化及剧烈吹打，以减少细胞损伤。

• 传代前应充分混匀细胞悬液，确保不同培养瓶之间的接种密度相对一致。

• 分瓶比例可根据细胞增殖速度、实验需求及培养状态进行调整。

• 建议记录每次传代日期、细胞代次、分瓶比例及形态变化，保持培养条件的连续性。

AMC-HN-8细胞冻存

• 细胞收集与计数

• 待 AMC-HN-8细胞生长状态良好时，按照常规传代方法进行PBS清洗和胰蛋白酶消化。

• 加入完全培养基终止消化，轻柔吹打，使细胞充分脱落。

• 将细胞悬液转移至离心管中，取适量细胞悬液进行细胞计数及活率检测。

• 以250 ×g离心3分钟，弃去上清液，收集细胞沉淀。

• 加入冻存液及分装

• 根据细胞数量加入适量General Freezing Medium，轻柔吹打，使细胞均匀重悬。

• 若产品说明未提供专属冻存密度，可参考ATCC通用冻存范围，即每毫升约含1×10⁶～5×10⁶个活细胞，实际密度应结合细胞恢复情况进行优化。

• 将细胞悬液分装至无菌冻存管中，常用分装体积为每管1 mL。

• 轻轻混匀后及时进行程序降温，减少细胞在含冻存保护剂环境中的停留时间。

• 注意：使用即用型冻存液时，应按照其产品配方和使用说明操作，不要自行额外添加DMSO，除非说明书明确要求。

• 程序降温及长期保存

• （1）程序降温

• 将分装好的冻存管放入程序降温盒或程序降温设备中，按照约-1℃/分钟的速率逐步降温。

• （2）-80℃过渡保存

• 将冻存管置于-80℃冰箱中进行程序降温，ATCC通用参考方法通常采用约24小时的降温过渡时间。

• （3）液氮长期保存

• 完成程序降温后，将冻存管转移至液氮储存系统进行长期保存。推荐的长期保存温度为-150～-196℃，并做好冻存位置及批次记录。

• （4）冻存质量验证

• 建议留取部分冻存管进行复苏验证，观察 AMC-HN-8细胞复苏后的活率、贴壁情况、形态及增殖能力，确认冻存效果。

• 冻存操作注意事项

• 优先选择生长状态良好、无明显异常的 AMC-HN-8细胞进行冻存。

• 冻存液应充分混匀，但避免剧烈吹打造成细胞损伤。

• 冻存保护剂加入后应尽快完成分装及降温。

• -80℃主要用于程序降温过渡，不建议将其作为细胞长期储存条件。

• 冻存后应保留完整的细胞批次、代次、冻存日期及储存位置记录。