AMC-HN-8-luc细胞（人喉鳞状细胞癌细胞）

AMC-HN-8-luc细胞是以人喉鳞状细胞癌细胞系AMC-HN-8为亲本构建的荧光素酶标记衍生细胞株，保留了亲本细胞的肿瘤组织来源及基本生物学背景。其亲本 AMC-HN-8细胞于1996年由韩国 Asan Medical Center（牙山医学中心）研究人员建立，研究团队通过采集9例头颈部肿瘤患者的原发病灶或转移灶新鲜组织，采用组织外植体培养及连续传代方式，建立了9株具有持续增殖能力的肿瘤细胞系。AMC-HN-8细胞来源于一名46岁韩国男性喉鳞状细胞癌患者的淋巴结转移灶，Cellosaurus 登记编号为 CVCL_5966。

其亲本 AMC-HN-8细胞在体外呈贴壁上皮样单层生长，并已通过裸鼠移植实验验证其体内成瘤能力。早期研究采用流式细胞术及间接免疫荧光技术，对细胞 DNA 含量以及整合素 α6、β4、β1 亚基和细胞间黏附分子 ICAM-1 的表达进行了分析，其中整合素 β4 表现出较高表达水平。在此基础上，AMC-HN-8-luc细胞通过引入荧光素酶报告系统，增加了生物发光检测功能。在相应底物存在的条件下，可通过检测细胞产生的发光信号，对细胞数量变化及肿瘤生长过程进行动态追踪，适用于喉鳞状细胞癌体内成瘤、肿瘤进展监测及抗肿瘤药物干预效果评价等研究。

AMC-HN-8-luc细胞特性特征

• 适用范围：AMC-HN-8-luc细胞的以下分子背景来自亲本 AMC-HN-8；具体衍生株是否保留这些特征，需以检测结果为准。

• 基因变异：亲本 TP53 存在 p.Gly293del（c.877_879delGGG）缺失变异，合子状态未注明；不能标注为 TP53 野生型。

• 整合素表达：表达 α6、β4 和 β1 整合素，其中 β4 表达极高；该结果属于表达证据。

• 层黏连蛋白受体：表达 67 kDa 层黏连蛋白受体；一项研究测得阳性比例为（80.9±0.9）%，抗体干预可抑制细胞黏附。

• JAB1/CSN5 表达：相较正常人口腔黏膜上皮 OME 对照细胞，JAB1/CSN5 蛋白表达升高。

• JAB1 敲低响应：增殖下降、凋亡增加，伴随 p-AKT 下降及 p53、cleaved caspase-3 升高；这些属于干预结果。

• EZH2 过表达响应：人为过表达后，增殖、S 期比例和体内成瘤能力增强，顺铂敏感性降低。

• luc 报告系统：具体荧光素酶类型、启动子、整合位点、拷贝数及表达稳定性尚未核实。

AMC-HN-8-luc细胞（人喉鳞状细胞癌细胞）参数表

AMC-HN-8-luc细胞（人喉鳞状细胞癌细胞）培养教程

AMC-HN-8-luc细胞复苏

• 提前准备完全培养基，并置于37℃预温。同时准备无菌离心管、培养瓶及细胞计数用品。检查冻存管标签，确认 AMC-HN-8-luc细胞名称、代次及冻存信息。

• 冻存细胞解冻

• 从液氮中取出冻存管后，立即放入37℃水浴中快速解冻，轻轻晃动冻存管，使细胞悬液均匀融化。

• 待冻存液中仅剩少量冰晶时取出，避免长时间水浴。

• 使用75%酒精消毒冻存管外壁后，转入生物安全柜。

• 将 AMC-HN-8-luc细胞悬液缓慢加入预温的完全培养基中，轻轻混匀，稀释冻存液。

• 细胞收集与接种

• 将稀释后的细胞悬液转入离心管，可参考300 × g离心5分钟。

• 小心弃去上清，去除含DMSO的冻存液。

• 使用新鲜完全培养基轻柔重悬细胞，取少量进行细胞计数及活率检测。

• 根据活细胞数量选择合适的培养瓶，将 AMC-HN-8-luc细胞接种于培养容器中。

• 轻轻摇匀，使细胞均匀分布，放入37℃、5% CO₂培养箱中培养。

• 复苏后观察

• 复苏后24小时左右观察 AMC-HN-8-luc细胞的贴壁情况、形态及培养液状态，必要时更换新鲜完全培养基，去除残留冻存液及死亡细胞。

• 待细胞逐渐恢复正常形态和增殖状态后，可根据实际生长情况进行传代。复苏初期不建议直接增加筛选药物压力，以免影响 AMC-HN-8-luc细胞的恢复。

AMC-HN-8-luc细胞传代

• 日常观察细胞生长状态，当 AMC-HN-8-luc细胞处于良好的对数生长期、细胞密度达到适宜水平且尚未过度汇合时进行传代。

• 该细胞为贴壁生长细胞，传代前应确认细胞形态正常，无明显污染、异常脱落或生长停滞现象。

• 细胞清洗

• 吸除培养瓶内的旧培养液。

• 加入适量不含钙、镁离子的PBS，轻轻晃动培养瓶，清洗细胞表面。

• 吸除PBS，避免残留血清影响后续消化效果。

• 细胞消化

• 加入适量胰酶消化液，使其均匀覆盖 AMC-HN-8-luc细胞层。

• 将培养瓶置于适宜条件下进行消化，并通过显微镜观察细胞状态。

• 当细胞逐渐变圆、细胞间隙增大并开始脱落时，及时终止消化。

• 加入适量完全培养基终止胰酶作用，轻柔吹打，使细胞形成均匀悬液。

• 消化过程中应避免过度处理，以免影响 AMC-HN-8-luc细胞的活率及后续贴壁能力。

• 细胞收集与重新接种

• 将细胞悬液转入离心管，可参考200 × g离心5～10分钟。

• 弃去上清，加入新鲜完全培养基重悬细胞。

• 取少量细胞悬液进行计数，根据细胞数量和生长状态确定接种比例。

• 将 AMC-HN-8-luc细胞接种至新的培养瓶中，补充适量完全培养基。

• 轻轻摇匀，使细胞分布均匀，放入37℃、5% CO₂培养箱继续培养。

• 传代比例应根据实际生长速度、细胞密度及活率调整，不建议长期过度传代或使细胞处于过度汇合状态。

AMC-HN-8-luc细胞冻存

• 按照细胞传代操作进行消化，待细胞充分脱落后加入完全培养基终止消化。

• 将 AMC-HN-8-luc细胞悬液转移至离心管，轻柔混匀。

• 离心收集细胞，可参考200 × g离心5～10分钟。

• 弃去上清，加入适量冻存液重悬细胞。

• 进行细胞计数，根据目标冻存密度计算每管分装体积。

• 分装冻存

• 将细胞悬液充分混匀，按照预定细胞数量分装至冻存管中。

• 拧紧冻存管盖，检查密封情况。

• 标注 AMC-HN-8-luc细胞名称、代次、冻存日期及每管细胞数量。

• 分装完成后及时进行程序降温，避免细胞长时间暴露于含DMSO的冻存液中。

• 程序降温及长期保存

• 使用程序降温盒或程序降温仪进行细胞降温。

• 推荐参考约1℃/分钟的降温速率。

• 可先将冻存管置于−80℃冰箱中降温过夜。

• 随后转移至液氮气相中进行长期保存，建议保存温度低于−135℃。

• 不建议将细胞冻存管直接从室温投入液氮，也不建议将−80℃作为长期冻存的常规保存条件。