KYSE450细胞（人食管鳞状细胞癌细胞）

KYSE450细胞系源自一位59岁日本男性患者的胸内食管组织，患者在治疗前被确诊为高分化的浸润性食管鳞状细胞癌。此癌症的浸润深度未超过粘膜下层，代表肿瘤处于相对早期阶段。KYSE450细胞系由日本京都大学的研究团队于20世纪90年代建立，携带p53基因突变和MYC癌基因扩增，这些分子特征与食管鳞癌的发生和发展息息相关。

KYSE450细胞表现出典型的上皮样形态，在体外实验中具有优良的生长能力。广泛应用于食管癌的基础生物学研究和药物筛选，能够较好地模拟人类食管鳞癌的生物学行为，成为食管癌研究的重要模型。

KYSE450细胞特性特征

• 基因突变：KYSE450细胞系携带p53基因的突变。
  

• 癌基因扩增：KYSE450细胞系还表现出MYC癌基因的扩增，MYC是一个重要的原癌基因，与细胞增殖和代谢调控相关。

• 细胞表型：KYSE450细胞在体外实验中显示出典型的食管鳞状细胞特征，这使其成为研究食管癌生物学的重要模型。

• 无菌检测：KYSE450细胞系在无菌检测中显示为阴性，包括对细菌、酵母和支原体的检测

KYSE450细胞参数表

KYSE450人食管鳞状细胞癌细胞培养教程

KYSE450细胞复苏

• 准备含有10%胎牛血清（FBS）的RPMI 1640培养基，并提前加热至37℃。
  

• 准备无菌离心管和水浴锅，水浴温度设为37℃。

• 从液氮罐中取出冻存的KYSE450细胞管，迅速放入37℃的水浴中，并轻轻晃动管子，快速解冻。
  

• 当KYSE450细胞悬液约90%融化时，立即取出细胞管，用75%酒精消毒管外表面后，在无菌条件下转移至无菌离心管中。

• 加入4-5 mL预热的RPMI 1640培养基，轻轻混匀。
  

• 以1000 rpm离心3分钟，去除上清液，避免残留的DMSO对KYSE450细胞产生毒性。

• 以1-2 mL新鲜培养基重悬KYSE450细胞，轻轻吹打使细胞分散。
  

• 将KYSE450细胞悬液转移至T25培养瓶或10 cm培养皿中，添加适量的培养基，并置于37℃、5% CO₂的培养箱中孵育。

KYSE450细胞传代

• 当KYSE450细胞长满培养瓶底部的80%-90%时，准备进行传代操作。
  

• 弃去培养基，用无钙镁的PBS（磷酸盐缓冲液）洗涤KYSE450细胞1-2次，以去除残留的血清。
  

• 加入1 mL胰蛋白酶-EDTA溶液（0.25%胰蛋白酶和0.53 mM EDTA），确保液体均匀覆盖KYSE450细胞表面。
  

• 在37℃培养箱中消化约1分钟，观察KYSE450细胞是否变圆且脱落，轻敲培养瓶帮助细胞完全脱落。

• 加入5-8 mL培养基终止消化，轻轻混匀后转移至无菌离心管中，以1000 rpm离心4分钟。
  

• 弃去上清液，加入1-2 mL新鲜培养基重悬KYSE450细胞。

• 将重悬后的KYSE450细胞按1:2至1:3的比例分至新的T25培养瓶中，加入新鲜的RPMI 1640培养基。
  

• 放入37℃、5% CO₂的培养箱中继续培养。

KYSE450细胞冻存

• 当KYSE450细胞状态良好且生长至80%-90%融合时，收集培养瓶中的细胞，将其转移至无菌离心管。
  

• 以PBS洗涤KYSE450细胞一次，去除培养基中的血清成分。
  

• 使用细胞计数仪或血球计数板进行KYSE450细胞计数，调整细胞浓度至5×10^6至1×10^7/mL。
  

• 配制冻存液（55% RPMI 1640基础培养基，40%胎牛血清，5% DMSO），混匀后加入KYSE450细胞悬液。

• 每支冻存管加入1 mL KYSE450细胞悬液，做好标识。
  

• 将冻存管放置在程序性降温盒中，置于-80℃冷冻24小时后转移至液氮中长期保存。