Het-1A细胞（人食道正常细胞）

HET1A细胞系是1986年从一名25岁男性的正常食管尸检组织中分离建立。HET1A细胞系通过质粒pRSV-T进行转染，质粒含有RSV-LTR启动子和猿猴病毒40（SV40）大T抗原编码序列，赋予细胞持续的增殖能力。
HET1A细胞上皮样细胞具有贴壁生长特性，并在钙的刺激下活化，但会受到胎牛血清和转化生长因子-β1、β2的抑制。研究发现，伏马菌素 B1 抑制 HET-1A 细胞的生长并诱导细胞凋亡，而合成类视黄醇 CD437 则通过 caspase-3 依赖途径诱导凋亡。
HET1A 细胞的核型为亚二倍体（34-40 条染色体），是研究食管致癌物效应的有力模型。

Het-1A人食道正常细胞特性特征

• 基因表达：HET1A细胞系能够表达细胞角蛋白，表明其上皮细胞的特性；SV40大T抗原的表达为研究其致瘤性提供了基础。

• 生长因子反应：Het1A细胞对钙刺激敏感，并受胎牛血清、转化生长因子-β1和转化生长因子-β2的抑制。

• 药物反应：伏马菌素B1能够抑制该细胞的生长并诱导细胞凋亡。合成类视黄醇CD437通过caspase-3依赖途径诱导细胞凋亡，显示出其在研究食道癌治疗中的潜力

Het-1A细胞参数表

Het-1A人食道正常细胞培养教程

细胞复苏步骤

• 配置完全培养基，包括基础培养基（如BEBM或DMEM）加10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素-链霉素（P/S）。将5 mL完全培养基加入15 mL离心管中，置于37℃水浴预热，确保为Het1A细胞复苏提供适宜的环境。

• 从液氮罐或-80℃冰箱中取出冻存的Het1A细胞，立即放入37℃水浴中解冻，轻轻摇动冻存管，加速Het1A细胞的解冻过程，约1分钟后迅速取出。

• 将解冻后的Het1A细胞悬液转移至含有预热完全培养基的离心管中，以1000 rpm离心5分钟，去除上清。用2 mL完全培养基轻轻重悬Het1A细胞沉淀。

• 将重悬后的Het1A细胞加入到T25培养瓶中，补充适量培养基（约8 mL），贴上标签后将培养瓶置于37℃、5% CO₂培养箱中，静置过夜，以确保Het1A细胞顺利贴壁生长。

Het1A细胞传代步骤

• 每2至3天观察Het1A细胞的生长状态，待细胞达到80%-90%的融合度时，准备进行传代操作。

• 弃去培养上清，使用无钙、镁离子的PBS缓冲液轻轻冲洗Het1A细胞1-2次。然后加入适量0.25%胰酶，消化Het1A细胞2-5分钟，观察细胞开始从培养瓶表面脱落。加入等体积完全培养基中和胰酶，轻轻吹打Het1A细胞，使其悬浮均匀。

• 在1000 rpm下离心5分钟，去除上清，重悬Het1A细胞，并按1:2至1:4的比例分装到新的培养瓶中，加入适量培养基，放入37℃、5% CO₂培养箱中，继续培养Het1A细胞。

Het1A细胞冻存步骤

• 配制适合Het1A细胞的冻存液，基础培养基中加入10%二甲基亚砜（DMSO）和20%胎牛血清。

• 按照传代步骤收集Het1A细胞后，重悬并将细胞按1×10^6 cells/mL的密度分装到冻存管中。

• 将装有Het1A细胞的冻存管置于-80℃冰箱中冷冻24小时后，再转移至液氮罐中长期保存。

培养注意事项

• Het1A细胞贴壁较为松散，操作时应格外小心，避免机械性损伤或细胞脱落。

• 收到Het1A细胞后，使用75%酒精消毒培养瓶外表面，并在37℃培养箱中静置2-4小时，待细胞稳定后再进行传代或其他实验操作。

• 建议在Het1A细胞解冻后使用新配置的完全培养基，避免使用运输过程中的培养基，以确保细胞状态最佳。