A549/DDP细胞（人肺腺癌顺铂耐药株）

A549/DDP是一种人源非小细胞肺癌耐药细胞系，由A549细胞系经过顺铂（DDP）诱导筛选而成，对顺铂显著的耐药性。原始的A549细胞系来源于一名58岁白人男性的肺腺癌组织。在A549/DDP细胞系中，继承了A549细胞通过胞苷二磷酸胆碱途径合成富含不饱和脂肪酸的卵磷脂的能力。

A549/DDP细胞特性特征

• 耐药性：a549/ddp细胞对顺铂（DDP）具有显著的耐药性。

• 脂质代谢特征：a549/ddp细胞能通过胞苷二磷酸胆碱途径合成含有高含量不饱和脂肪酸的卵磷脂。

• 转染特征：转染了GFP（绿色荧光）蛋白，便于荧光显微镜下观察和追踪。

• 蛋白质组学特征：通过比较蛋白质组学研究，A549/DDP细胞与A549细胞在蛋白表达谱上存在显著差异。鉴定出13种差异表达蛋白质，这些蛋白与细胞代谢、结构、解毒和DNA修复、以及信号转导等相关。

A549/DDP细胞参数表

A549/DDP人肺腺癌顺铂耐药株培养教程

复苏步骤

• 快速解冻A549/DDP细胞：在37°C水浴中解冻1-2分钟。

• 将细胞悬液转移到含15ml预热完全培养基（不含DDP）的离心管中。

• 以1000rpm离心5分钟，弃上清。

• 用5-10ml完全培养基（不含DDP）重悬A549/DDP细胞。

• 将细胞转移至T25培养瓶或10cm培养皿中。

• 置于37°C，5% CO2培养箱中培养A549/DDP细胞。

常规培养

• 观察A549/DDP细胞状态，当细胞密度达到70-80%时进行传代。

• 使用PBS洗涤细胞1-2次。

• 加入1ml 0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液，37°C消化1-3分钟。

• 显微镜下观察A549/DDP细胞是否脱落。

• 添加等体积含血清的培养基以终止消化。

• 以1000rpm离心5分钟，弃上清。

• 用新鲜完全培养基重悬A549/DDP细胞，按1:2或1:3比例传代。

耐药性维持

• 当A549/DDP细胞密度达到约8×10^5个/ml时，开始添加DDP。

• 初始DDP浓度设置为0.25 μg/ml，然后逐渐增加至0.5-1.0 μg/ml。

• 如A549/DDP细胞生长缓慢，可适当降低DDP浓度或暂时使用不含DDP的培养基。

注意事项

• 每2-3天更换一次A549/DDP细胞的培养基。

• 定期检查A549/DDP细胞的形态和生长状况。

• 避免细胞过度生长或长期处于高密度状态。

• 定期进行无菌检测和顺铂敏感性测试。

• 冻存A549/DDP细胞时使用无血清冻存液，不需添加DDP。

特殊处理

• 如果A549/DDP细胞生长状态不佳，可暂时使用不含DDP的培养基培养1-2周，待细胞状态恢复后再逐步添加DDP。

细胞生长对实验的影响

• 细胞密度和传代频率：A549/DDP细胞在达到70-80%汇合度时需要传代，通常每2-3天进行一次。过度生长或高密度状态可能影响A549/DDP细胞的生理状态及实验结果。

• 耐药性维持：维持A549/DDP细胞的顺铂耐药性需要定期调整DDP浓度，从500ng/ml逐步增加至1000ng/ml。细胞生长缓慢时需调整DDP浓度或暂时使用不含DDP的培养基。

• 生长速度对实验结果的影响：A549/DDP细胞的生长速度会影响蛋白表达谱和实验一致性，因此需要在最佳生长状态下进行实验。

• 细胞状态监控：定期观察A549/DDP细胞的形态和生长状态，必要时调整培养条件。