HEK293T/17人胚肾细胞

HEK293T/17细胞系是293T细胞系的衍生株，293T细胞系本身是通过在HEK293细胞中引入SV40大T抗原基因而获得的高效转染细胞株。HEK293细胞最初由荷兰生物学家Alex van der Eb于1973年从合法堕胎的健康女性胎儿的胚胎肾细胞中提取，并通过转化腺病毒DNA片段建立。

293T/17细胞系则是在293T细胞（293tsA1609neo）的基础上通过克隆和筛选获得，具有高效生成逆转录病毒的能力，广泛应用于基因工程和病毒学研究。

HEK293T/17人胚肾细胞特性特征

• HEK293T/17细胞持续表达猿病毒40（SV40）大T抗原，具备高效的转染能力，能够支持外源基因的复制和表达。

• 逆转录病毒生成：293T/17细胞能够生成高滴度的感染性逆转录病毒，适合用于病毒载体的生产和研究.

• 贴壁能力：293T/17细胞虽然是贴壁细胞，但其贴壁能力较弱，需要在培养时特别注意

HEK293T/17人胚肾细胞参数表

HEK293T/17人胚肾细胞培养教程

细胞复苏

• 解冻：将含有1 mL HEK293T/17细胞悬液的冻存管放置于37℃水浴中，迅速摇晃解冻。

• 混合：解冻后，立即将HEK293T/17细胞悬液加入4 mL预热的完全培养基中，轻轻混合均匀。

• 离心：以1000 rpm离心5分钟，去除上清。

• 重悬：用新鲜的完全培养基重悬HEK293T/17细胞，并将其转移至T25培养瓶中。

培养条件

• 培养基：使用DMEM培养基，补充10%胎牛血清（FBS）、1% L-谷氨酰胺（2mM）、1%非必需氨基酸（NEAA）和1%双抗（抗生素-抗真菌素混合）。

• 培养环境：37℃，5% CO2。

• 贴壁能力：HEK293T/17细胞的贴壁能力较弱，建议使用预铺0.2%明胶的培养瓶或培养皿，以增强细胞附着。

传代

• 传代比例：HEK293T/17细胞密度达到70%-90%时进行传代，比例为1:3至1:5。

• 消化：使用0.25% Trypsin-0.53 mM EDTA消化HEK293T/17细胞。

• 传代频率：每周换液2-3次，保持HEK293T/17细胞的健康生长。

冻存

• 冻存液：使用95%完全培养基和5% DMSO的混合液。

• 冻存步骤：将HEK293T/17细胞以适当密度收集后，加入冻存液，分装入冻存管中。将细胞管逐步降温至-80℃，然后转入液氮中进行长期保存。

注意事项

• 细胞健康监测：定期观察HEK293T/17细胞的形态和生长状态，确保无污染，并及时处理异常情况。

• 细胞复苏后：HEK293T/17细胞复苏后第一次传代建议采用T25培养瓶的1:2传代比例，以促进细胞恢复和增殖。

• 贴壁能力：HEK293T/17细胞的贴壁能力较差，可能导致细胞在培养中脱落。为改善此问题，推荐使用预铺0.2%明胶的培养瓶或培养皿。

• 细胞过密生长：避免HEK293T/17细胞过密生长，这可能导致细胞脱落和死亡。需定期检查细胞密度，并在达到适当密度时进行传代。

• 复苏后细胞状态：解冻过程需迅速且均匀，以减少对HEK293T/17细胞的损伤，从而保持细胞的活力。

• 冷冻保存问题：长时间保存可能降低HEK293T/17细胞的存活率。建议在对数生长期内进行冷冻，并尽量缩短冷冻保存时间。

• 增殖速度变化：由于SV40大T抗原的表达，HEK293T/17细胞的增殖速度较快，但可能影响基因组稳定性。在进行基因编辑实验时需特别注意多基因型克隆现象。