
293F细胞(人胚肾上皮细胞) (暂不提供)
- 来源:胚肾
- 细胞特征:贴壁细胞 ,上皮细胞样
- 培养基:293F细胞专用培养基
- 其他:293F细胞表达腺病毒的E1A基因,该基因参与转录激活,使细胞能够高效表达蛋白质
293-F人胚肾上皮细胞是从HEK-293细胞系克隆并适应于293培养基的细胞系。HEK-293细胞系最初由荷兰科学家Alex van der Eb于1973年通过用腺病毒5型DNA转染正常人胚胎肾细胞建立。293-F细胞系适应于悬浮培养,非常适合行大规模生产。
293F细胞特性特征
293F细胞系源自HEK-293细胞,后者通过整合腺病毒5型DNA而永生化。
293F细胞表达腺病毒的E1A基因,该基因参与转录激活,使细胞能够高效表达蛋白质。
293F细胞以其高效的蛋白表达能力著称,能够在无血清培养基中快速生长并表达高水平的重组蛋白。
293F细胞具有高转染效率,适合用于重组蛋白和病毒载体的生产。
基因表达:293-F细胞表达腺病毒E1A基因。
染色体特征:与其他HEK-293衍生细胞系类似,293-F细胞可能具有不正常的核型,通常表现出比正常人类细胞更多的染色体数
293F细胞参数表
细胞名称 | 293F细胞(人胚肾上皮细胞) |
细胞别称 | HEK-293-F; HEK293-F; HEK-293F; HEK293F; 293-F; 293F; HEK293-F; 人胚肾细胞-F克隆细胞 |
种属来源 | 人 |
组织来源 | 胚肾 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长;悬浮生长 |
细胞类型 | 转化细胞系 |
建立年份 | 原始HEK-293细胞建立于1973年 |
培养基 | MEM培养基,90%;FBS,10% |
无血清培养 | 可在无血清培养体系中快速生长 |
生长条件 | 气相:空气,95%;二氧化碳,5%;温度:37℃ |
传代方法 | 1:2至1:6,每周2次 |
冻存条件 | 90%完全培养基+10%DMSO,液氮储存 |
消化液 | 0.25% Trypsin-0.53mM EDTA |
基因整合 | 含有腺病毒5型DNA片段 |
基因表达 | 表达E1A蛋白 |
转染效率 | 高,适合各种转染方法(如磷酸钙、PEI或脂质体) |
蛋白表达 | 高效表达重组蛋白 |
病毒生产 | 适用于重组蛋白和病毒载体的生产 |
特殊应用 | 适合大规模生物反应器生产 |
支原体检测 | 阴性 |
生长速度 | 快速(F代表Fast-growth) |
贴壁特性 | 相对293T细胞,贴壁性较好 |
耐受性 | 可耐受低Ca²⁺培养体系 |
细胞系来源 | 由HEK-293细胞衍生 |
染色体特征 | 通常具有不正常核型,染色体数目多于46条 |
适用领域 | 生物技术、制药、基因治疗研究 |
培养教程
293F人胚肾上皮细胞培养教程
细胞复苏
解冻293-F细胞:将冻存管中的1mL 293-F细胞悬液迅速放入37℃水浴中解冻,轻轻摇晃以确保均匀解冻。
添加培养基:解冻后,立即加入4mL培养基以稀释293-F细胞悬液,并轻轻混合均匀。
离心:在1000RPM下离心4分钟,弃去上清液。
补加培养基:补加1-2mL培养基,轻轻吹打混匀。
培养:将293-F细胞悬液转移至培养瓶中,或转移至10cm培养皿中加入约8mL培养基,培养过夜。
换液与检查:次日换液并检查293-F细胞的密度。
细胞传代
传代条件:当293-F细胞的密度达到80%-90%时进行传代。
PBS洗涤:弃去培养上清液,用无钙镁PBS洗涤293-F细胞1-2次。
消化293-F细胞:加入1mL消化液(0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA),在37℃培养箱中消化1-2分钟。
观察与终止消化:显微镜下观察293-F细胞是否大部分圆形并脱落,若是,迅速将培养瓶轻敲后加入少量培养基终止消化。
离心处理:加入6-8mL培养基,轻轻混匀,离心1000RPM下4分钟,弃去上清液。
分瓶培养:补加1-2mL培养液,轻轻混匀,将293-F细胞悬液按1:2比例分配至新的培养皿或培养瓶中,每瓶加入8mL培养基。
细胞冻存
准备冻存液:配制90%完全培养基与10% DMSO的冻存液。
细胞悬液制备:将293-F细胞悬液与冻存液混合。
分装:将混合后的293-F细胞悬液分装至冻存管中。
程序降温:逐步降温至-80℃,然后转移至液氮中长期保存。
备注
293-F细胞系源自HEK-293细胞系,适合悬浮培养,广泛应用于重组蛋白和病毒载体的生产。
293-F细胞在无血清培养基中也能快速生长,并能够达到高细胞密度,从而支持大规模的生物制品生产。
虽然293-F细胞可以进行贴壁生长,但其主要优势在于悬浮培养。