GL261-luc细胞（小鼠胶质瘤细胞系）

GL-261-Luc是在小鼠胶质瘤细胞系GL261基础上构建的荧光素酶（luciferase）稳定表达株，可进行活体生物发光成像，广泛应用于胶质瘤相关的体内外研究。

GL261-luc细胞起源可追溯至1939年，研究人员将化学致癌剂3-甲基胆蒽（3-methylcholanthrene）直接注射入C57BL/6 小鼠颅内，成功诱导形成胶质瘤原代肿瘤。该肿瘤随后在同系 C57BL/6 小鼠中通过皮下或颅内连续移植方式长期维持，保证其遗传背景的稳定性。20世纪90年代中期，研究者才从移植瘤组织中分离细胞，并建立了稳定的体外贴壁生长胶质瘤细胞系。利用慢病毒载体将荧光素酶基因导入GL261细胞，获得可稳定表达 luc 的衍生株GL-261-Luc。

GL261-luc细胞特性特征

• 携带TP53（肿瘤抑制基因）和KRAS（原癌基因）突变，伴随C-Myc高度表达，促进细胞增殖。

• 高度表达MHC I类分子（增强免疫识别），有限表达MHC II类分子、CD80和CD86（共刺激分子）；

• Luc基因稳定表达，但随传代次数增加荧光强度逐渐减弱，需加入1-5μg/ml嘌呤霉素筛选维持（初次1μg/ml，渐增至5μg/ml，漂浮细胞>60%时暂停）。

• 贴壁生长，呈成纤维细胞样形态（梭形、多角形或卵圆形），增殖较慢（倍增时间100–120小时）

• 具有高度侵袭性但不易转移，肿瘤持续性强，不会自发消退

• 在免疫完整小鼠模型中表现出一定免疫原性

小鼠胶质瘤GL261-luc细胞参数表

小鼠胶质瘤GL261-luc细胞培养教程

GL261-luc细胞复苏操作流程

• 从液氮中迅速取出 GL261-luc细胞 冻存管，短暂空气平衡以挥发残余液氮；

• 将冻存管置于 37 ℃ 水浴中轻轻晃动，控制在 2 分钟内完成解冻；

• 将细胞悬液转入含 6–7 ml 预热培养基的离心管，1100 rpm 离心 4 min，弃上清；

• 用 1–2 ml 完全培养基重悬 GL261-luc细胞，将重悬后的 GL261-luc细胞 接种至 T25 培养瓶；

• 标注细胞名称（GL261-luc细胞）、复苏日期及代次；

• 置于 37 ℃、5% CO₂ 培养箱静置培养；

• 复苏后 24 h 更换培养基，去除未贴壁及死亡的 GL261-luc细胞。

• 整个 GL261-luc细胞 复苏过程建议控制在 10 分钟内完成；

• 首次复苏后应检测 luc 发光强度及细胞活率。

GL261-luc细胞传代培养流程

• 当 GL261-luc细胞融合度达到 80–95% 时进行传代，避免细胞长期过度融合，以减少 luc 表达衰减风险。

• 吸弃旧培养基，PBS 清洗 1 次；

• 加入 1–2 ml 0.25% 胰酶-EDTA，37 ℃ 消化 2–5 min；显微镜下确认 GL261-luc细胞 圆缩并开始脱落；

• 加入 2–4 ml 含血清培养基终止消化；吹打形成单细胞悬液，转入离心管；

• 1100 rpm 离心 4 min，弃上清；

• 用 2 ml 完全培养基重悬，按 1:3–1:5 比例分瓶培养 GL261-luc细胞。

Luc 表达维持

• 日常传代可使用 0.5–2 μg/ml 嘌呤霉素 维持 GL261-luc细胞；

• 次日观察细胞状态后更换培养基；

• 建议每隔数周对 GL261-luc细胞 进行一次梯度全药筛选。

GL261-luc细胞冻存流程

• 选择状态良好、处于对数生长期的 GL261-luc细胞；冻存时细胞融合度控制在 70–80%

• 按传代流程消化并制备 GL261-luc细胞单细胞悬液；计数后调整至 1–5 × 10⁶ cells/ml；

• 使用冻存液（90% FBS + 10% DMSO）重悬；

• 每管分装 1 ml，清晰标注 GL261-luc细胞 名称、代次与日期；

• 置于程序降温盒中（约 −1 ℃/min）；−80 ℃ 过夜后转入液氮长期保存。

• 避免将 luc 信号明显减弱的 GL261-luc细胞 用于长期保存。

补充说明

• 干冰运输到达的 GL261-luc细胞 应立即转入液氮，或在 24 h 内完成复苏；

• 所有涉及生物发光成像的实验前，均建议对 GL261-luc细胞 进行 luc 信号预验证。