LMTK细胞（小鼠胸腺激酶缺陷细胞）

LM/TK [LMTK-]小鼠胸腺激酶缺陷细胞系是从100天大的雄性小鼠的皮下结缔组织（主要为乳晕和脂肪组织）分离出的细胞，具有成纤维细胞样形态，表现为贴壁生长，LMTK细胞为自发永生化细胞。LM/TK细胞系常用于转染实验，尤其是在与L Wnt-3A和L Wnt-5A细胞的条件培养基比较中作为对照使用。

LMTK细胞系具有超二倍体的染色体数，模态数为45，范围在42到48之间。核型分析显示，细胞中常见21个标记染色体，其中包括13条双臂染色体和8条顶着丝粒染色体。此外，还存在通过罗伯逊易位产生的4个标记染色体，分别来自4、12、14和15号染色体。正常的X、12、14、15和16号染色体缺失，X染色体以Rb（X.3）臂的形式存在。详细的核型描述可参考《癌症遗传学》中的文献（Cytogenet Cell Genet, 24:95-107, 1987）。

LMTK细胞特性特征

• 基因缺陷：LMTK细胞缺乏胸腺激酶（Thymidine Kinase, TK），使其对某些药物（如HAT）敏感，同时具有5-溴-2'-脱氧尿苷（BrdUrd）抗性。

• 致瘤性：在裸小鼠模型中，LM/TK细胞具有致瘤性，皮下接种10^7个细胞后，21天内以100%的频率出现肿瘤。
  

• 抗原表达：LMTK细胞系表达H-2k抗原，表明其在免疫系统中的潜在应用。

• LMTK细胞经检测发现鼠痘病毒呈阴性。
  

LMTK细胞参数表

LMTK小鼠胸腺激酶缺陷细胞培养教程

细胞复苏

• 配制完全培养基：DMEM培养基中添加10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素-链霉素（P/S）。
  

• 将冻存的LMTK细胞从液氮中取出，并迅速放入37℃的水浴中，轻轻摇动冻存管，确保LMTK细胞均匀解冻。

• 细胞解冻后，立即将LMTK细胞悬液转移至离心管中，加入4 mL完全培养基以稀释细胞悬液。
  

• 在1000 RPM（约250 g）下离心4分钟，弃去上清液，保留LMTK细胞沉淀。
  

• 加入1-2 mL完全培养基，将LMTK细胞轻轻吹打以充分悬浮。
  

• 将重悬后的LMTK细胞移入T25培养瓶中，并置于37℃培养箱中过夜培养。培养环境应为95%空气和5% CO₂。
  

细胞培养

• 使用DMEM培养基，补充10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素-链霉素（P/S），适合LMTK细胞的生长。
  

• LMTK细胞的培养温度应保持在37℃，气相条件为95%空气和5% CO₂。
  

• 每周换液2-3次，以维持LMTK细胞的最佳生长状态。
  

细胞传代

• 当LMTK细胞密度达到80%-90%时，即可进行传代。
  

• 弃去培养基，用不含钙、镁的PBS溶液洗涤LMTK细胞1-2次。
  

• 加入1 mL 0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察LMTK细胞是否变圆并开始脱落。
  

• 迅速加入4-6 mL完全培养基终止消化过程，轻轻吹打使LMTK细胞完全悬浮。
  

• 在1000 RPM下离心4分钟，弃去上清液。将LMTK细胞重悬于1-2 mL完全培养基中，然后按1:3至1:4的比例接种到新的培养瓶中。
  

细胞冻存

• 使用以下比例配置冻存液：55%基础培养基、40%胎牛血清（FBS）和5%二甲基亚砜（DMSO），适合LMTK细胞的冻存。
  

• 按上述传代步骤收集LMTK细胞，离心后弃去上清液。
  

• 将LMTK细胞重悬于预先准备好的冻存液中，确保混合均匀。
  

• 将LMTK细胞悬液分装入冻存管中，并做好标签标识。
  

• 将冻存管逐步降温，首先在-80℃冰箱中冷冻，随后移至液氮罐中长期保存。
  

注意事项

• LMTK细胞系仅供科研使用，不得用于人类或动物的治疗。

• 定期监测LMTK细胞是否有污染迹象，如有污染应立即处理。

• 操作过程中应严格遵守生物安全规程，确保实验室环境安全。