
人原代输尿管上皮细胞
- 来源:尿道组织;人输尿管组织
- 细胞特征:贴壁,上皮细胞样
- 培养基:原代上皮细胞专用培养基
- 其他:广谱角蛋白(PCK)免疫荧光染色为阳性,细胞纯度高于90%
人原代输尿管上皮细胞源自正常人输尿管组织。
输尿管是一对细长的管道,连接着肾脏和膀胱,其结构包括筋膜层、肌肉层和粘膜层。粘膜层含有移行上皮细胞,通常有4-5层。输尿管上皮细胞是输尿管生物学研究的基础,也是尿路上皮肿瘤和输尿管损伤等研究的重要对象。
输尿管上皮细胞特性
输尿管连接着肾脏和膀胱,呈扁圆柱状,约25-35厘米长,直径约为0.5-0.7厘米。
输尿管的结构包括三层管壁:筋膜层、肌肉层和粘膜层。粘膜层内含有移行上皮细胞,通常呈4-5层。
人输尿管上皮细胞是输尿管生物学研究的基础。
经过广谱角蛋白(PCK)免疫荧光染色鉴定,确定其为输尿管上皮细胞,细胞纯度高于90%。
细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等病原体。
输尿管上皮细胞生长方式为上皮样,适合于贴壁培养。
人输尿管上皮细胞在尿路上皮肿瘤、输尿管损伤和组织工程学研究等领域有广泛应用。
输尿管上皮细胞参数表
细胞类型 | 人输尿管上皮细胞(人原代细胞) |
细胞来源 | 正常人输尿管组织 |
结构特征 | 输尿管呈扁圆柱状,管径约0.5-0.7厘米,全长约25-35厘米,由筋膜层、肌肉层和粘膜层组成,粘膜层含有移行上皮细胞(通常4-5层) |
细胞鉴定 | 广谱角蛋白(PCK)免疫荧光染色为阳性,细胞纯度高于90% |
无病原体 | 不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等病原体 |
生长方式 | 上皮样,贴壁培养 |
应用领域 | 尿路上皮肿瘤、输尿管损伤和组织工程学研究等 |
培养条件 | 气相:95%空气,5%二氧化碳;温度:37摄氏度;湿度:70%-80% |
培养基配置 | 原代细胞专用培养基,含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 |
冻存条件 | 90%FBS,10% DMSO |
倍增时间 | 每周2至3次 |
换液频率 | 2-3天一次 |
培养教程
人原代输尿管上皮细胞培养教程
准备工作
准备PBS(磷酸盐缓冲盐水)和0.25%胰酶。
准备含血清的完全培养基并预热至37摄氏度。
传代步骤:
从培养容器中吸出用过的细胞培养基并丢弃。
用PBS轻轻冲洗细胞,每10cm²培养表面积使用约2mL PBS。轻轻加入冲洗液以避免搅动细胞层,前后轻柔摇晃容器数次。
从培养容器中吸出冲洗液并丢弃,向培养瓶中加入0.25%胰酶(试剂量应足以覆盖细胞层)。轻轻摇晃容器,使试剂完全覆盖细胞层,对于T25细胞培养瓶留约200 μL。
将培养容器放在培养箱中孵育5分钟左右,在显微镜下观察细胞解离情况。
当细胞解离程度≥90%时,倾斜培养容器,使细胞上液体尽快流尽,加入所用胰酶两倍体积的完全培养基,吹打细胞层表面数次,使培养基分散。
将细胞转移到无菌离心管中,以200×g的离心力离心3-5分钟。
用最少体积的完全培养基重新悬浮细胞沉淀,将细胞悬液按照推荐比例稀释,并将适量体积的细胞悬液转移到新的细胞培养容器中,再将细胞放回培养箱。
注意事项:
细胞密度越高越难消化,一般0.25%胰酶消化3-5分钟。
当细胞难以消化时,可通过延长消化时间或分次消化。
分次消化步骤:使用预热的PBS和胰酶进行消化,直到细胞块中间全部收缩变圆。
相关资料
STR鉴定及相关
参考文献
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