Jurkat, Clone E61细胞（人T淋巴细胞白血病细胞）

Jurkat, Clone E6-1细胞是一种来源于急性T淋巴细胞白血病的假二倍体人类细胞系，由Schneider博士在1984年建立，源自一名14岁男性患者的外周血样本。E61细胞为Jurkat-FHCRC细胞株的克隆衍生物，专门用于研究免疫系统疾病以及免疫学和免疫肿瘤学。

Jurkat, Clone E6-1细胞具有T淋巴细胞的特性，具有46条染色体（核型46，XY，-2，-18，del（2）（p21p23），del（18）（p11.2)），其中74%的细胞具有模式染色体数目，5.3%的细胞为多倍体。E61细胞系不含支原体污染，且大部分细胞具有正常的X和Y染色体。

E61细胞特性特征

• 抗原表达：E61细胞系表达T细胞表面抗原CD3。Jurkat细胞系表达T细胞抗原受体（TCR）。

• 白细胞介素-2（IL-2）：Jurkat, Clone E6-1细胞能够在佛波酯和外源凝集素或抗T3单克隆抗体的刺激下产生大量IL-2，这使其成为研究T细胞功能和信号传导的重要模型。
  

E61细胞参数表

Jurkat, Clone E61人T淋巴细胞白血病细胞培养教程

E61细胞复苏

• 从液氮中取出E61细胞的冻存管，迅速放入37℃水浴中解冻，期间轻轻摇动冻存管以加速解冻。

• 解冻完成后，立即将E61细胞悬液转移至含有预热的完全培养基（RPMI 1640 + 10% FBS + 1% P/S）的15ml离心管中，缓慢加入5ml培养基以稀释并去除DMSO。

• 以1200rpm离心5分钟，小心弃去上清。

• 用5ml预热的完全培养基重悬E61细胞沉淀，然后转移到T25培养瓶中。

• 加入足量完全培养基，使总容量达到10-12ml。

• 将E61细胞置于37℃、5% CO₂培养箱中培养。

E61细胞常规传代

• 每2-3天进行一次传代，当E61细胞密度达到1-2 × 10^6 cells/ml时，开始传代操作。

• 轻轻吹打E61细胞悬液，以确保形成单细胞悬液。

• 将E61细胞悬液转移至15ml离心管中，以1200rpm离心5分钟。

• 弃去上清，用预热的完全培养基重悬E61细胞沉淀。

• 根据需要的传代比例（通常为1:2至1:4）将E61细胞悬液分配至新的培养瓶中。

• 加入适量的预热完全培养基，总体积保持在10-12ml。

• 继续在37℃、5% CO₂条件下培养E61细胞。

E61细胞冻存

• 将E61细胞悬液转移至15ml离心管中，以1200rpm离心5分钟。

• 弃去上清，用冻存液（92% FBS + 8% DMSO）重悬E61细胞沉淀，使E61细胞浓度达到2-3 × 10^6 cells/ml。

• 将重悬的E61细胞分装至预冷的冻存管中，每管1ml。

• 使用程序冻存机或泡沫盒在-80℃冰箱中进行程序性冷冻E61细胞。

• 24小时后，将冻存管转移至液氮罐中长期保存E61细胞。

注意事项

• 传代和操作过程中要避免E61细胞过度消化，并轻柔处理以减少气泡的产生。

• 定期检查E61细胞的生长状态，确保E61细胞处于对数生长期。

• 定期进行支原体、细菌、和真菌检测，确保E61细胞培养环境无污染。

转染技术优化E61细胞中IL-2表达的步骤

• 选择转染试剂：可选择使用脂质体转染试剂（如Lipofectamine 2000或JetPEI）或电转法，具体选择取决于实验需求及E61细胞的状态。

• 准备转染质粒：构建含有IL-2基因的表达质粒，并确保使用适当的启动子（如CMV启动子）以驱动E61细胞中IL-2的表达。

  
  

• 转染过程

• 按照转染试剂的说明书，准备转染复合物（通常是将转染试剂与质粒DNA混合，静置一段时间以形成复合物）。

• 将转染复合物加入重悬的E61细胞中，轻轻混匀。

• 将混合液转移至培养瓶中，继续在37℃、5% CO₂条件下培养E61细胞。

  
  

• E61细胞中IL-2表达诱导：转染后24-48小时，加入佛波酯和抗T3单克隆抗体，刺激E61细胞以诱导IL-2的表达。

• E61细胞中IL-2表达检测：通过ELISA、流式细胞术或实时定量PCR（qPCR）等方法检测E61细胞中IL-2的表达水平。