C33A细胞（人宫颈癌细胞系）

C33A细胞是由N·Auersperg从宫颈癌切片中建立的细胞系，最初来源于一名66岁的白人子宫颈癌患者的宫颈上皮细胞。C33A细胞具有致瘤性。
C33A细胞展示出假二倍体核型和上皮细胞形态，但随着连续传代，其核型显示出不稳定性。

C-33A细胞表达视网膜母细胞瘤蛋白（pRB），然而pRB的大小异常。重要的是，细胞中的p53基因表达上调，并且在密码子273处存在点突变，导致Arg→Cys的替换。此外，C-33A细胞对人乳头瘤病毒DNA和RNA呈阴性。这些特征使得C-33A细胞在癌症研究中特别有用，包括用于细胞3D培养和癌症相关机制的研究。

C-33A细胞是一个假二倍体的人类细胞系，模式染色体数为46，出现在70%的检测细胞中。多倍体细胞占8.6%。每个假二倍体细胞一致检测到7条标记染色体。它们是：t（1q17q）、t（1p21q）、del（18）（q21.3）、der（1）t（1；17）（p16；q21.3。还发现了其他几种标记物，但在分析的15个中期中仅出现一次。未检测到DM和HSR。结构正常的N1缺失。通常每个细胞中有两条X染色体。

基因表达：p53+；pRB+

同工酶：AK-1，1；ES-D，1；G6PD，B；GLO-I，2；Me-2，2；PGM1, 1；PGM3，1

C33A细胞特性

• C33A细胞来源于一名66岁的白人子宫颈癌患者的宫颈上皮细胞。

• p53基因表达上调，并且在密码子273处有点突变，导致Arg→Cys的替换。

• C33A细胞具有假二倍体核型，模式染色体数为46，存在染色体不稳定性。

• C33A细胞视网膜母细胞瘤蛋白（pRB）存在，但其大小异常。

• C33A细胞对人乳头瘤病毒DNA和RNA呈阴性。

• C33A细胞系具有致瘤性。

• 由N·Auersperg从宫颈癌切片中建立，最初展示亚二倍体核型和上皮细胞形态。

C33A细胞参数表

C33A人宫颈癌细胞系培养

细胞复苏

• 从液氮中取出含有1mL C33A细胞悬液的冻存管，在37℃水浴中快速摇晃解冻。

• 将解冻后的C33A细胞悬液缓慢滴入到含有4-6mL预热的完全培养基（例如MEM或DMEM）的离心管中，混合均匀。

• 在1000rpm条件下离心3-5分钟，弃去上清液。

• 补充4-6mL预热的完全培养基，轻轻吹匀后将C33A细胞悬液转移至含有6-8mL完全培养基的培养瓶（或培养皿）中。

• 将培养瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中培养过夜。

• 第二天检查C33A细胞的粘附和生长情况，根据需要进行细胞密度的检查和调整。

细胞传代

• 当C33A细胞生长至80%-90%的密度时，即可进行传代培养。

• 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

• 加入1-2mL0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA消化液于培养瓶中（具体用量根据瓶子大小调整），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（观察细胞是否开始脱落）。

• 在显微镜下观察C33A细胞的消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，快速将培养瓶拿回操作台轻轻敲打几下。

• 加入3-4mL含有10% FBS的培养基来终止消化，轻轻吹打混匀。

• 在1000rpm条件下离心3-5分钟，弃去上清液。

• 补充1-2mL预热的培养基后吹匀，按1:2到1:5的比例将C33A细胞悬液分到新的含有5-6mL预热培养基的培养瓶中。

• 将培养瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中继续培养。

细胞冻存

• 在C33A细胞生长状态良好时进行细胞冻存。

• 弃去培养基，加入适量的胰酶消化细胞至大部分细胞变圆脱落。

• 在1000rpm条件下离心8-10分钟，去除上清液。

• 根据冻存需求，将C33A细胞重悬于含有90% FBS和10% DMSO的冻存液中，建议冻存密度为1×10^6~1×10^7个细胞/ml。

• 将冻存管置于程序降温盒中，过夜置于-80℃冰箱冷冻，随后转移到液氮容器中长期保存。