
KMB17细胞(人胚肺二倍体细胞) (暂不提供)
- 来源:胚肺
- 细胞特征:贴壁细胞 , 成纤维细胞样
- 培养基:MEM+10% FBS+1% P/S
- 其他:传代能力:可传代至25代以上,具有稳定的增殖能力
KMB-17人胚肺二倍体细胞系是由中国医学科学院昆明医学生物学研究所在1975年建立的,来源于一名4周龄女性胚胎的正常肺组织。KMB17细胞具有二倍体细胞特性,呈现典型的成纤维细胞样形态,并以贴壁方式生长,能够在常规培养条件下稳定扩增,且可传代至25代以上,保持较强的增殖能力。KMB-17细胞系在生物医学领域,特别是肺损伤、分化以及病毒学研究中具有重要应用,常被用作转染实验的宿主细胞。需要注意的是,尽管最初认为该细胞系来自肺组织,但后续同工酶分析和DNA指纹技术显示该细胞系已被HeLa细胞污染,因此在研究中应特别留意这一污染风险,以确保实验结果的可靠性。
KMB17细胞特性特征
细胞类型:二倍体细胞,形态上呈现成纤维细胞样,适合贴壁生长。
生长特性:细胞以贴壁方式生长,呈短梭形,具有良好的增殖能力。
基因组特征:KMB-17细胞为二倍体,其基因组中含有两个完整的染色体组,适合用于遗传学和分子生物学研究。
同工酶分析:KMB17细胞系的同工酶分析显示其具有人类特征,包括多种酶类的表达,如AST、MD等。
KMB17细胞参数表
细胞名称 | KMB17细胞(人胚肺二倍体细胞) |
别称 | KMB 17; KMB17 |
种属来源 | 人 |
组织来源 | 胎肺 |
形态特征 | 成纤维细胞样,贴壁生长 |
建立时间 | 1975年 |
建立地点 | 中国医学科学院昆明医学生物学研究所 |
培养基 | DMEM + 10%胎牛血清 (FBS)+1% P/S |
生长条件 | 温度:37℃;气相:95%空气,5%二氧化碳;湿度:70%-80% |
传代比例 | 1:2至1:6,每周2-3次 |
倍增时间 | 每周2至3次 |
冻存液 | 90% FBS + 10% DMSO |
冻存条件 | 液氮储存 |
支原体检测 | 阴性(培养法) |
病原体检查 | HIV、乙型肝炎、丙型肝炎均为阴性 |
同工酶 | 人B, NP, G8PG, MD, AST |
培养教程
KMB17人胚肺二倍体细胞培养教程
KMB17细胞复苏
从液氮中取出冷冻的KMB17细胞,立即放入37℃的水浴中快速解冻,轻轻摇动冻存管以均匀加热解冻。确保已准备好完全培养基,如MEM培养基,并添加10%胎牛血清(FBS)以维持KMB17细胞的正常生长。
细胞完全解冻后,迅速将KMB17细胞悬液(约1 mL)加入4 mL预温至37℃的完全培养基中,轻轻混匀以确保KMB17细胞的均匀分布。
将KMB17细胞悬液在1000 RPM下离心4分钟,弃去上清液,然后加入1-2 mL新鲜培养基,轻轻吹打以重新悬浮细胞。
将复苏后的KMB17细胞悬液转移至T25培养瓶或10 cm培养皿中,加入8 mL培养基。将培养皿放置于37℃、5% CO₂的培养箱中,过夜后更换新鲜培养基,观察KMB17细胞的贴壁情况及生长状态。
KMB17细胞传代
当KMB17细胞生长至80%-90%汇合时,需进行传代,以保持细胞活力。细胞密度过高可能影响KMB17细胞的增殖能力,因此建议及时传代。
弃去培养瓶中的旧培养基,用无钙镁的PBS缓冲液轻轻清洗KMB17细胞一次,去除残留培养基。
加入0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液消化KMB17细胞,通常2-3分钟即可。细胞开始脱落时,立即加入完全培养基终止消化,并轻轻吹打以形成均匀的KMB17细胞悬液。
将消化后的KMB17细胞悬液转移至无菌离心管,在1000 RPM下离心5分钟,弃去上清液。重新悬浮KMB17细胞于新鲜的完全培养基中,按1:3或1:4的比例接种到新的培养瓶中,并加入足量培养基。
KMB17细胞适合在37℃、5% CO₂条件下生长,湿度控制在70%-80%为最佳。
KMB17细胞冻存
使用90%的完全培养基和10%的二甲基亚砜(DMSO)作为KMB17细胞冻存液。
将KMB17细胞悬液分装至冻存管中,缓慢降温至-80℃,并于24小时后转移至液氮中进行长期保存。
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STR鉴定及相关
Amelogenin | X |
CSF1PO | 12 |
D3S1358 | 16 |
D5S818 | 13 |
D7S820 | 9,11 |
D8S1179 | 11,13 |
D13S317 | 9,12 |
D16S539 | 11,13 |
D18S51 | 14,17 |
D21S11 | 29,30 |
FGA | 20,27 |
Penta D | 9,13 |
Penta E | 12,15 |
TH01 | 7 |
TPOX | 10,11 |
vWA | 14,18 |
参考文献
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