WI-38细胞系（人胚肺细胞）

WI-38人胚肺细胞系是第一个用于人类疫苗制备的人类二倍体细胞系，由美国生物学家Leonard Hayflick于1960年建立。WI-38细胞是从一个人工流产的14周雌性胎儿的肺组织中分离。

WI-38细胞是体外培养的人胚肺成纤维细胞，属于有限细胞系，与通常为非整倍体的永生化细胞系不同，WI-38细胞在体外培养时能够维持二倍体状态，各方面特性与正常细胞相似。

WI-38细胞系在冷冻过程中曾发现第8通道安瓿含有微球菌污染，但通过在抗生素存在下的多次传代处理后得到清除。

为了增强细胞的生长，可以在培养基中添加肿瘤坏死因子α（TNF-α）。由于其稳定的二倍体特性和对病毒的敏感性，WI-38细胞是研究病毒感染机制和开发疫苗的理想模型。

WI-38细胞系特征特性

• wi-38细胞是有限细胞系,寿命约为50±10代、可通过添加TNF-α促进生长

• wi-38细胞表达G6PD B型同工酶

• 分子特征:逆转录酶表达阴性

• 病毒敏感性:易感水疱性口炎病毒、单纯疱疹病毒、伪狂犬病病毒、脊髓灰质炎病毒1型等

• wi-38细胞是首个用于人类疫苗制备的人类二倍体细胞系、可用于灭活病毒检测、适合作为转染宿主

• wi-38细胞与正常体细胞性状相近、为终末分化细胞,不具分化潜能

WI-38细胞系参数表

WI-38人胚肺细胞系培养教程

WI-38细胞复苏

• 从液氮中取出冻存的WI-38细胞管，迅速放入37°C水浴中解冻。

• 解冻后立即用70%酒精消毒WI-38细胞管外表面。

• 将WI-38细胞悬液转移到含有10ml预热培养基的离心管中，1000rpm离心5分钟。

• 弃去上清，加入新鲜培养基重悬WI-38细胞，转移到T25培养瓶中。

WI-38细胞培养

• 将WI-38细胞培养瓶放入37°C、5% CO2的培养箱中。

• 每隔2-3天更换WI-38细胞培养基，观察细胞生长情况。

WI-38细胞传代

• 当WI-38细胞达到80-90%汇合时，进行传代。

• 去除旧培养基，用PBS洗涤WI-38细胞。

• 加入0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，37°C孵育3-5分钟，观察WI-38细胞脱落。

• 加入新鲜培养基中和胰蛋白酶，轻轻吹打瓶壁，形成WI-38细胞悬液。

• 1000rpm离心5分钟，弃去上清，重悬WI-38细胞。

• 按1:2比例将WI-38细胞接种到新的培养瓶中，加入适量新鲜培养基。

WI-38细胞计数

• 使用血细胞计数板进行WI-38细胞计数。

• 将WI-38细胞悬液吸出少许，滴加在计数板上，静置3分钟后镜下观察。

• 计算4大格WI-38细胞总数，按公式计算WI-38细胞浓度。

WI-38细胞冻存

• 当WI-38细胞状态良好时，可进行冻存。

• 收集WI-38细胞悬液，离心后重悬于冻存液（90%血清，10% DMSO）。

• 分装到冻存管中，逐步降温至-80°C，随后转移到液氮中长期保存。

注意事项

• 培养WI-38细胞过程中保持无菌操作，避免污染。

• WI-38细胞传代时避免过度消化，影响细胞活性。

• 定期观察WI-38细胞形态和生长状态，及时调整培养条件。

常见污染问题及预防措施

• 细菌污染：严格无菌操作，定期消毒WI-38细胞培养室和器具。

• 真菌污染：保持WI-38细胞培养环境清洁，定期检查和清理培养箱。

• 支原体污染：定期检测和使用无污染的试剂和培养基。

• 病毒污染：使用无污染的WI-38细胞系和试剂，操作时注意个人防护。

• 交叉污染：严格分隔操作不同WI-38细胞系，避免器具混用和操作不规范。