OP9细胞（小鼠骨髓基质细胞）

OP9细胞起源于新生的(C57BL/6 x C3H)F2 -op/op小鼠的颅盖骨。这种小鼠因M-CSF基因突变，无法生成功能性巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）。

OP9细胞的优势在于其不需要外源生长因子或复杂的胚胎结构即可实现共培养，从而为研究造血细胞的发育和分化机制提供了简便的系统。广泛应用在免疫学和干细胞研究，尤其是在探索体外诱导造血分化的过程。

OP9小鼠骨髓基质细胞特性特征

• 基因突变：OP9细胞小鼠因编码巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）基因中的突变，无法生成功能性M-CSF。

• M-CSF缺失：OP9细胞缺乏功能性M-CSF的表达。M-CSF通常对胚胎干细胞（ES细胞）向非巨噬细胞血细胞的分化具有抑制作用，因此OP9细胞能够有效促进胚胎干细胞向红细胞、髓系细胞和B细胞谱系的分化。

• 共培养：OP9细胞可与小鼠胚胎干细胞共培养，诱导其分化为多种血细胞类型，包括红细胞、髓系细胞和B细胞。

• 研究价值：该细胞系的独特性使其成为研究造血细胞发育和分化机制的重要工具，尤其在免疫学和干细胞研究中具有广泛应用

OP9细胞参数表

OP9小鼠骨髓基质细胞培养教程

OP9细胞的收货处理

• 消毒：收到OP9细胞后，使用75%酒精消毒培养瓶的外壁，以防止外界污染。

• 恢复：将OP9细胞培养瓶（如T25）放入37°C的培养箱中稳定2-4小时，以帮助细胞恢复最佳状态。

• 观察：使用4X或5X显微镜观察OP9细胞状态，确认贴壁和细胞活力，必要时记录并拍照（10×和20×显微镜下各2-3张）保存。

OP9细胞状态确认

• 初始贴壁观察：在培养箱中放置2-3小时后，检查OP9细胞的贴壁情况及活性。

• 细胞密度调整：如果OP9细胞密度较低（低于60%），建议更换培养基。去除旧的培养基，加入6-8 mL新鲜的完全培养基，继续在37°C培养箱中培养。

OP9细胞的传代培养

• 传代时机：当OP9细胞覆盖度达到70%-80%时，进行传代培养。此时，细胞处于快速生长期，适合扩增。

• 传代比例：通常采用1:2的比例进行首次传代，即一个T25瓶的OP9细胞可传代至两个T25瓶或两个6 cm培养皿。

传代步骤

• 洗涤：弃去培养基，使用无钙、无镁的PBS缓冲液洗涤OP9细胞1-2次，以去除残留物和浮游细胞。

• 消化：加入1 mL消化液（0.25%胰蛋白酶 + 0.02% EDTA），轻轻摇动，使消化液均匀覆盖OP9细胞。将培养瓶置于37°C培养箱中消化1-3分钟，期间密切观察OP9细胞的消化情况。

• 终止消化：当OP9细胞开始脱离培养瓶底部时，立即加入等体积的完全培养基以终止消化过程。

• 离心：将消化后的OP9细胞悬液转移至离心管，离心1000 rpm，持续5分钟。弃去上清，保留细胞沉淀。

• 重悬与接种：将细胞沉淀重悬于新鲜的完全培养基中，按照适当的密度接种到新的培养瓶中。

OP9细胞的培养条件

• 培养基：使用MEM-α培养基，添加20%胎牛血清和1%抗生素/抗真菌剂（P/S），以保证OP9细胞的营养需求和抗感染能力。

• 培养环境：维持培养环境为95%空气和5%二氧化碳的气相，温度恒定在37°C，以确保OP9细胞的最佳生长条件。

OP9细胞培养的注意事项

• 细胞密度管理：应保持OP9细胞密度在4 x 10³ ~ 1 x 10⁴ cells/cm²之间，以确保细胞最佳的生长状态。密度过高或过低均会影响OP9细胞的健康。

• 支原体检测：定期进行支原体检测，以防止支原体污染，影响OP9细胞的实验结果。

• 培养基更换：每3天更换一次培养基，确保OP9细胞有充足的营养供应和适宜的生长环境。

OP9细胞的冻存与复苏

• 冻存：将OP9细胞使用无血清冻存液分装至冻存管中，逐步降温至-80°C后转入液氮中长期保存。

• 复苏：将冻存的OP9细胞置于37°C水浴中快速复苏，随即将细胞转移至含有新鲜完全培养基的培养瓶中，继续培养。