MCF10A细胞专用培养基

产品百科

MCF10A培养基常用添加物和浓度范围

MCF10A细胞培养基常用的添加物及其浓度范围主要包括：
马血清（Horse Serum）：约5%
人表皮生长因子（EGF）：约20 ng/mL
牛胰岛素（Insulin）：约10 μg/mL
氢化可的松（Hydrocortisone）：0.5 μg/mL左右
非必需氨基酸（Non-essential Amino Acids）：1%
青霉素-链霉素（Penicillin-Streptomycin，P/S）：100 U/mL-100 μg/mL
霍乱毒素（Cholera Toxin）：100 ng/mL

MCF10A细胞传代与培养基更换的最佳时间

MCF10A细胞培养基更换的最佳时间通常为每周2-3次，保持培养基的新鲜和营养供给。一般在细胞培养后1-2天观察细胞状态，根据pH变化和细胞代谢状况决定是否换液。培养基颜色变黄或细胞代谢活跃时应及时更换培养基。
细胞传代的最佳时间是当细胞达到70%-80%融合度时进行，此时细胞处于最佳生长状态，避免过度融合导致细胞生长受限或状态改变。传代比例常为1：2至1：4，遵循细胞消化充分、但不过度消化，胰酶消化时间一般为25-30分钟左右。
此外，MCF10A细胞贴壁较慢，传代后需培养24-48小时观察贴壁情况，确保细胞良好附着后再进行后续操作。消化过程中需用含血清的培养基终止胰酶活性，避免细胞损伤。

传代时如何避免MCF10A过度接触抑制与形态改变

及时传代：避免细胞密度过高，最好在细胞长至70%-80%融合度时即进行传代，防止细胞过于拥挤产生接触抑制，保持细胞的增殖能力和正常形态。
合理传代比例：一般传代比例控制在1:2至1:4之间，防止细胞密度骤降影响细胞状态，也避免太密造成过度接触。
适度消化：传代时使用适量胰酶消化，时间控制在25-30分钟，避免过度消化引起细胞损伤和形态异常。
充分吹打分散：消化后细胞应轻柔吹打，避免成团，确保单细胞均匀贴壁生长。
适时更换培养基：保持培养基新鲜，避免代谢产物积累导致细胞状态改变。
适用添加剂：部分研究提到使用ROCK抑制剂等辅助药物能帮助维持细胞形态小而具有增殖能力。
常规观察：密切观察细胞形态变化，发现扁平、增大等异常应及时调整操作。

使用哪些细胞因子可延迟MCF10A诱导的形态改变

延迟MCF10A细胞因诱导的形态改变，特别是防止上皮-间质转化（EMT），常使用的细胞因子和分子抑制剂主要包括针对TGF-β信号通路的抑制剂：
SB431542：一种选择性抑制TGF-β受体I激酶（ALK5）的ATP竞争性抑制剂，能阻断TGF-β诱导的SMAD2/3磷酸化，抑制EMT过程。
GW788388：抑制TGF-β受体I和Ⅱ激酶活性，同样抑制TGF-β信号，减少EMT标志基因的表达。
这两种抑制剂能够有效阻止TGF-β信号诱导的MCF10A细胞形态改变，保持细胞的上皮特性，延迟甚至阻止EMT的发生。
此外，一些研究还发现表皮生长因子（EGF）、胰岛素、氢化可的松等培养基中常用添加因子对维持MCF10A细胞的正常上皮形态有辅助作用。