hTERT-HPNE细胞（人胰腺导管上皮细胞）

hTERT-HPNE细胞是一种人胰腺导管上皮细胞系，起源于一名52岁男性患者的胰腺组织。通过使用含有hTERT基因的逆转录病毒表达载体（pBABEpuro），这些细胞被成功转染，获得了永生化特性。hTERT基因的引入使细胞端粒酶活性增加（呈阳性），从而避免了细胞衰老，即使经过超过150次的细胞倍增，这些细胞仍保持旺盛的增殖能力。
hTERT-HPNE细胞适用于3D细胞培养、药物开发及高通量筛选实验，提供了一个研究胰腺导管细胞生物学及相关疾病的有力工具。

hTERT-HPNE细胞特性特征

• htert-hpne细胞在特定条件下可诱导分化为胰腺导管样细胞

• 通过逆转录病毒表达载体（pBABEpuro）转导人胰管细胞，表达hTERT基因
  

• htert-hpne细胞中可检测到Nestin、p-glycoprotein和碳酸酐酶II等胰腺导管细胞的标记物

• 增殖能力：细胞在经过超过150次的倍增后仍保持旺盛的增殖能力，未表现出衰老现象。

• 分子特征：细胞内端粒酶活性呈阳性，表明其具有不衰老特性。

• 表型特征：hTERT-HPNE细胞展现出腺泡到导管转化的中间表型，未分化状态下表达巢蛋白，并显示Notch信号通路的活性。

• 诱导分化能力：在丁酸钠和5-氮-2'-脱氧胞苷的诱导下，hTERT-HPNE细胞能够形成胰腺导管细胞，其特征包括多药耐药蛋白（MDR-1）、碳酸酐酶II及细胞角蛋白7、8、19的表达。

hTERT-HPNE细胞参数表

hTERT-HPNE人胰腺导管上皮细胞培养教程

hTERT细胞复苏与初代培养

• 从液氮罐中取出冻存的hTERT细胞，将其迅速置于37°C的水浴中。轻轻摇动冻存管，直到hTERT细胞完全融化。为防止hTERT细胞因温度变化过大而受损，融化过程应尽可能快速完成。

• 将融化后的hTERT细胞悬液小心转移至15 mL离心管中。缓慢加入5 mL预热的完全培养基（DMEM高糖培养基，含10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素-链霉素（P/S））。随后，1200 rpm离心3分钟，弃去上清，用5 mL预热的完全培养基重悬hTERT细胞。

• 将重悬后的hTERT细胞接种到一个T25培养瓶中，并加入足量的完全培养基（总体积控制在10-12 mL）。将hTERT细胞培养瓶置于37°C、5% CO2的培养箱中进行培养。

hTERT细胞常规培养与传代

• 每2-3天更换一次新鲜的完全培养基。更换时应根据hTERT细胞的生长状态及培养基颜色的变化来判断是否需要更换。

• 当hTERT细胞在培养瓶内贴壁生长并达到80%-90%的汇合度时，需进行传代。常见的传代比例为1:2至1:4。

• 预热0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液至37°C。倒掉培养瓶内的旧培养基，加入3-5 mL PBS轻轻洗涤hTERT细胞表面，然后弃去PBS。
  

• 向培养瓶中加入1-2 mL预热的胰酶，置于37°C孵育消化。消化过程中，建议首次使用显微镜观察，以判断最佳消化时间——通常当hTERT细胞形态变圆且轻拍瓶壁时可见细胞开始脱落时，即为合适的消化时间。

• 一旦消化完成，立即加入3 mL完全培养基以终止消化反应。使用移液枪轻轻吹打瓶壁，以确保hTERT细胞完全从瓶壁脱落。

• 收集hTERT细胞悬液并以1200 rpm离心3分钟，弃去上清。用适量完全培养基重悬hTERT细胞，并按适当的传代比例接种到新培养瓶中。

• 将接种好的hTERT细胞培养瓶重新放置于37°C、5% CO2的培养箱中继续培养。

hTERT细胞培养注意事项

• hTERT细胞复苏后，建议尽快更换新鲜的培养基，以确保hTERT细胞有充足的营养和最佳的生长环境。

• 若发现培养瓶有破裂或培养液有漏液，需立即检查hTERT细胞是否受到污染。如确认为污染，需采取适当措施处理受污染的hTERT细胞和培养器皿。

• 若发现hTERT细胞悬浮于培养基中而未能贴壁，可将培养瓶平放在培养箱中1-2小时以观察hTERT细胞贴壁情况。如果大部分hTERT细胞重新贴壁，则可以继续培养并更换培养基。若hTERT细胞仍不贴壁，可将其离心收集并转移至新培养瓶中，同时在原培养瓶中保留部分培养液继续培养，直至hTERT细胞稳定贴壁。