PL45细胞（人胰腺导管腺癌细胞） （暂不提供）

PL45细胞系是一种胰腺癌上皮细胞系，于1992年从一名男性胰腺导管癌患者的原发肿瘤中分离获得。患者被确诊为低分化胰腺导管腺癌。PL45细胞系与Panc 10.05细胞系来源相同，均来自该患者的胰腺组织，因而它们在遗传特性和生物学行为上具有高度相似性。
PL45细胞在K-ras基因的第12密码子处发生了突变，GGT->GAT的突变导致天冬氨酸替代了甘氨酸。这种K-ras突变与Panc 10.05细胞系完全相同。细胞系中的DPC4和BRCA2基因保持野生型，未发生突变。
PL45细胞呈上皮样，主要以贴壁方式生长，且具有快速的增殖能力。在胰腺癌机制的研究中得到了广泛应用。

PL45细胞特性特征

• 基因突变：K-Ras基因：在密码子12处表现出GGT->GAT突变，导致天冬氨酸替代甘氨酸（K-Ras+）；p53基因：在密码子255处有ATC->AAC突变，导致天冬酰胺替代异亮氨酸（p53+）。

• 基因表达：BRCA2基因：表达正常（BRCA2+）；DPC4基因：表达正常（DPC4+）；p16基因：具有野生型，但在PL45细胞中转录沉默并甲基化。

• PL45细胞系中包含以下癌症相关基因：BRCA2+、DPC4+、K-Ras+、p53+

• PL45细胞具有野生型细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK4）基因。

PL45细胞参数表

PL45人胰腺导管腺癌细胞培养教程

PL45细胞复苏步骤

• 从液氮罐中取出PL45细胞冻存管，迅速放入37℃水浴中，保持轻微摇晃，确保在30-60秒内完全解冻。

• 用75%酒精消毒PL45细胞冻存管外表面，确保无污染后打开管盖，将PL45细胞悬液转移至无菌离心管中。

• 向离心管中缓慢加入4-6 mL预热的完全培养基，轻轻混匀PL45细胞悬液。

• 以1000 RPM离心5分钟，弃去上清液，保留沉淀的PL45细胞。

• 重新悬浮PL45细胞于1-2 mL新鲜培养基中，将其转移至预先准备好的培养瓶中，并置于37℃培养箱中过夜。

• 次日更换新鲜培养基，清除复苏过程中的代谢废物，并监测PL45细胞的贴壁及生长情况。

PL45细胞传代操作

• 当PL45细胞密度达到80%-90%时需进行传代操作。

• 首先弃去培养瓶中的旧培养基，并使用不含钙镁的PBS冲洗PL45细胞1-2次，以去除残留的血清成分。

• 加入1-2 mL 0.25%胰蛋白酶溶液（含0.53 mM EDTA），并在37℃下消化1-2分钟，期间通过显微镜观察PL45细胞的消化进程。

• 当大部分PL45细胞开始圆化并脱落时，立即加入3-4 mL含10% FBS的完全培养基中止消化反应。

• 将混合液吸入离心管中，1000 RPM离心5分钟，弃去上清液。

• 重新将PL45细胞悬浮于1-2 mL新鲜培养基中，并按1:2至1:6的比例分配到新的培养瓶中，加入6-8 mL完全培养基，置于37℃培养箱中继续培养。

PL45细胞冻存步骤

• 在PL45细胞生长至对数生长期并状态良好时进行冻存操作。

• 在冻存前一天更换培养基，确保PL45细胞处于最佳生长状态。

• 传代后，用PBS冲洗PL45细胞，并使用胰蛋白酶消化细胞。细胞脱落后，加入完全培养基中止消化。

• 以1000 RPM离心5分钟，弃去上清，将PL45细胞重悬于适量的冻存液中，确保最终浓度为10% DMSO和1x10^6 cells/mL。

• 将PL45细胞悬液分装至冻存管中，标记清楚相关信息。

• 将冻存管置于程序化降温盒中，以每分钟1℃的降温速率降温至-80℃，然后转移至液氮罐中长期保存。