NE4C细胞（小鼠神经干细胞） （暂不提供）

NE-4C小鼠神经干细胞系是一种源自9日龄小鼠胚胎脑囊泡、缺乏功能性p53基因的神经干细胞。ne-4c细胞系广泛应用于神经科学研究，具有自我更新和多向分化的潜能，能够在适宜的条件下分化为神经元和星形胶质细胞。NE-4C细胞在形态上呈现上皮样，并以贴壁形式生长。

NE4C细胞特性特征

• 诱导分化：在视黄酸的诱导下，NE-4C细胞能够分化为神经元和星形胶质细胞。
  

• 植入实验：转染GFP的NE-GFP-4C细胞植入成年、新生和胎儿小鼠的前脑或早期鸡胚的中脑和前脑囊泡中，能够发育出形态分化的神经元。

• 抗原表达：NE-4C细胞表达多个关键的干细胞标志物：Sox-2、Otx-2、En-1。

• 基因缺失：由于来源于p53基因敲除小鼠，NE-4C细胞缺乏功能性p53基因，这可能影响细胞的增殖和凋亡机制。

• 细胞周期调控：p53基因的缺失可能使得NE-4C细胞在细胞周期调控和应激反应方面表现出不同于正常细胞的特征。

NE4C细胞参数表

NE4C小鼠神经干细胞培养教程

细胞复苏

• 预热37℃水浴锅。
  

• 配制好NE4C细胞的培养基，使用MEM基础培养基，添加10%胎牛血清（FBS）和1%抗生素（青霉素-链霉素）。

• 从液氮中取出冻存管，迅速放入37℃水浴中，轻轻摇晃解冻，解冻过程应在1-2分钟内完成。
  

• NE4C细胞解冻后，立即加入4 mL预热的培养基，轻轻混匀以稀释DMSO。

• 在1000 rpm下离心3分钟，弃去上清液。
  

• 加入1-2 mL新鲜培养基，轻轻吹打NE4C细胞，使其均匀悬浮。

• 将NE4C细胞悬液转移至T25培养瓶中，加入适量培养基，置于培养箱中培养过夜。
  

• 第二天更换培养基，检查NE4C细胞密度与状态。

NE4C细胞传代

• 当NE4C细胞密度达到80%-90%时，即可进行传代操作。
  

• 准备不含钙、镁离子的PBS溶液用于洗涤细胞。

• 弃去培养上清液，用PBS润洗细胞1-2次，以去除残留培养基和代谢废物。
  

• 加入1 mL 0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液，确保覆盖NE4C细胞表面。
  

• 将培养瓶置于37℃培养箱中，消化1-3分钟，观察NE4C细胞状态。当细胞变圆并开始脱落时，即可终止消化。

• 轻敲培养瓶壁，加入2-3 mL含有10% FBS的培养基终止消化，轻轻混匀。
  

• 将NE4C细胞悬液转移至无菌离心管中，1000 rpm离心4-5分钟，弃去上清液。
  

• 加入1-2 mL新鲜培养基，轻轻吹打NE4C细胞悬液均匀。
  

• 按1:2比例将NE4C细胞接种至新的T25培养瓶中，加入8 mL培养基。

• 将新接种的培养瓶置于37℃、5% CO₂的培养箱中继续培养。
  

NE4C细胞冻存

• 当NE4C细胞状态良好时，可进行冻存操作。
  

• 将NE4C细胞及培养液转移至无菌离心管中。

• 在1000 rpm下离心4分钟，弃去上清液后，用PBS清洗NE4C细胞一次。
  

• 使用细胞计数器或台盼蓝染色法计数NE4C细胞，调整细胞浓度至1×10^6 cells/mL。
  

• 将NE4C细胞悬液与冻存液按1:1混合，冻存液配方为90%胎牛血清 + 10% DMSO。
  

• 将混合液分装至冻存管中，做好标记。
  

• 先将冻存管放入-80℃冰箱中逐步降温，之后转移至液氮中长期保存。

注意事项

• 所有操作均应在无菌条件下进行，以避免NE4C细胞污染。

• 所有试剂和培养基应在使用前预热至37℃，以保证NE4C细胞在适宜的温度下操作。

• 定期检查NE4C细胞的生长状态，及时传代或调整培养条件，确保细胞健康与活力。

温度对NE4C细胞的影响

• 生长表现：在37℃的标准培养条件下，NE4C细胞增殖速度较快，倍增时间约为12小时。当细胞密度达到80%-90%时适合进行传代操作。NE4C细胞形态通常呈上皮样，生长状态良好。

• 低温影响：当温度低于37℃时（如室温或4℃），NE4C细胞生长速率会显著降低，可能导致细胞凋亡或生长停滞。

• 高温影响：超过37℃的环境（如40℃或更高）会导致NE4C细胞受到热应激，可能引发细胞死亡。因此，应严格控制培养温度，以保证NE4C细胞的正常生长