id8-luc细胞（小鼠卵巢上皮癌细胞、荧光素酶标记）

id8-luc细胞基本信息

ID8-Luc细胞是一种由小鼠卵巢癌细胞系 ID8 衍生而来的荧光素酶标记细胞（荧光素酶标记的小鼠卵巢上皮癌细胞）。通过在 ID8 亲本细胞中导入荧光素酶报告基因，使其能够在体内外实验中产生可检测的生物发光信号，从而实现对肿瘤细胞生长及分布情况的动态监测。Luc 是 Luciferase（荧光素酶）的缩写，通常指萤火虫荧光素酶。荧光素酶与 GFP、mCherry 等荧光蛋白具有不同的信号检测原理：前者在底物参与的酶促反应中产生生物发光，后者则通过特定波长的光激发产生荧光信号。id8-luc细胞主要用于生物发光成像（BLI），不能直接将其与普通荧光蛋白标记细胞混为一谈。

ID8-Luc细胞并非单一、统一的细胞构建版本。不同实验室或研究团队可能采用不同的载体、荧光素酶基因及筛选方式建立衍生株。如，部分细胞仅表达萤火虫荧光素酶，部分衍生株还同时携带 GFP、mCherry 或嘌呤霉素抗性基因。

亲本细胞 ID8 的来源

ID8-Luc的亲本细胞为 ID8细胞，来源于 C57BL/6 小鼠的正常卵巢表面上皮细胞，从成年未交配雌性 C57BL/6 小鼠的卵巢组织中分离表面上皮细胞，通过体外培养和长期连续传代，使细胞逐渐发生自发性转化，并从晚代细胞中筛选、建立具有肿瘤形成能力的克隆，最终获得 ID8 细胞系。

其来源及衍生关系可概括为：C57BL/6 成年雌鼠卵巢组织 → 分离正常卵巢表面上皮细胞 → 长期体外培养及连续传代 → 细胞自发性转化 → 筛选建立 ID8 亲本细胞系 → 导入荧光素酶报告基因 → 获得 ID8-Luc 衍生细胞。

ID8-Luc细胞的构建来源及常见类型

不同研究中使用的 ID8-Luc细胞可能具有不同的构建背景。部分研究使用由 Duke University Medical Center 的 Robin Bachelder 博士提供的 ID8 亲本细胞及其荧光素酶表达衍生株。另外，Cellosaurus 收录的 ID8-Luc2（CVCL_IU16）属于 ID8 的荧光素酶标记衍生株，通过基因转导引入经过哺乳动物密码子优化的萤火虫荧光素酶基因 Luc2，并具有嘌呤霉素抗性筛选标记。还有研究使用 ID8-Luc-mCherry-Puro 等复合标记细胞，同时表达荧光素酶和 mCherry，并携带嘌呤霉素抗性基因，以满足生物发光成像、荧光检测及细胞筛选等不同实验需求。ID8-Luc2的相关构建研究涉及美国堪萨斯大学 K. Roby 提供的 ID8 亲本细胞，以及华盛顿大学 John B. Liao、Mary L. Disis 等研究团队采用 pLentiIII-Luc2 慢病毒载体进行报告基因导入、药物筛选和克隆验证的工作，相关研究发表于 2015 年。Cellosaurus 将其登记为 ID8-Luc2（RRID）。

id8-luc细胞特性特征

• 外源荧光素酶表达：id8-luc细胞核心特征为表达荧光素酶报告基因，可用于生物发光检测；具体是 Luc、Luc2 或其他版本，取决于构建来源。

• Trp53 未检出功能性突变：经典 ID8 亲本不是天然的 p53 突变或缺失模型；不能将普通 ID8-Luc 与 Trp53 敲除衍生株混同。

• p53 功能保留：顺铂或 MDM2 抑制剂 Nutlin-3 处理后，经典 ID8细胞 的 p53 蛋白可上调，提示其仍具有应激响应能力。

• p53–p21 转录反应完整：顺铂处理可诱导 p53 下游靶基因 Cdkn1a（编码 p21）表达增加，支持 p53 转录功能保留。

• Brca1、Brca2 未检出功能性突变：经典 ID8 亲本不是天然 BRCA1／BRCA2 缺陷模型，不能将其直接描述为“BRCA 缺失型卵巢癌细胞”。

• 同源重组修复功能完整：经典 ID8细胞具有同源重组修复能力，不属于天然的同源重组缺陷型（HRD）模型。

• DNA 损伤后可形成 RAD51 核内焦点：电离辐射或 rucaparib 处理后可诱导 RAD51 焦点形成，是其同源重组修复功能保留的重要实验依据，不等同于“基础 RAD51 高表达”。

• WT1 阳性表型：经典研究中，ID8细胞来源移植瘤呈 WT1 强而弥漫的免疫组化阳性；

• PAX8 阴性表型：同一研究中的 ID8 移植瘤呈 PAX8 阴性，提示其与典型输卵管分泌上皮来源的高级别浆液性癌存在分子表型差异。

• Nf1、Rb1 未检出功能性突变：经典 ID8 不具有这两类抑癌基因失活的典型背景；相关基因敲除模型属于另外构建的衍生株。

• 缺少多种典型卵巢癌驱动突变：经典研究未发现 Arid1a、Pik3ca、Braf、Ctnnb1、Kras 等基因的相关典型功能性突变。

• 并非“无突变”细胞：全外显子组研究仍检测到其他编码变异；“缺少典型驱动突变”不等于“基因组正常”，也不能据此判断所有基因均无拷贝数改变。

• 不天然等同于 PARP 抑制剂高敏感模型：与亲本相比，工程化 Trp53／Brca2 双敲除衍生株的 rucaparib 敏感性明显提高，说明 BRCA／同源重组背景会显著影响药物反应。

• CCL2 上调具有基因背景依赖性：经典研究中，Trp53 敲除可引起 CCL2 表达增加及髓系细胞浸润变化；不能将“CCL2 高表达”直接列为普通 ID8-Luc 的固定特点。

• 不完整再现人高级别浆液性卵巢癌：其保留功能性 p53、同源重组修复完整等特点，与典型人高级别浆液性卵巢癌的关键分子背景存在差异，是使用该模型时的重要限制。

id8-luc细胞（小鼠卵巢上皮癌细胞、荧光素酶标记）参数表

id8-luc细胞（小鼠卵巢上皮癌细胞荧光素酶标记）培养教程

ID8-Luc细胞复苏操作步骤

• 预温培养基： 将完全培养基预热至 37℃，在 T25 培养瓶中加入 4 mL 完全培养基，同时在 15 mL 离心管中准备 6–7 mL 完全培养基，为后续细胞稀释做好准备。

• 快速解冻： 从液氮中取出 ID8-Luc细胞冻存管，立即置于 37℃水浴中轻轻晃动，使冻存液快速融化。当冻存液基本融化、仅剩少量冰芯时取出，通常约需 1 分钟。

• 消毒转移： 使用 70%–75% 酒精擦拭冻存管外壁，待酒精挥发后，在无菌操作台内打开冻存管，将 ID8-Luc细胞悬液缓慢转移至预先准备好的 15 mL 离心管中，轻轻混匀。

• 离心收集： 室温下以 1100 rpm 离心 4 分钟，弃去上清液，注意保留细胞沉淀。不同离心机转子产生的相对离心力不同，实际操作应根据转子参数进行换算。

• 细胞重悬： 加入约 1 mL 新鲜完全培养基，轻柔吹打，使 ID8-Luc细胞沉淀充分分散，避免产生大量气泡。

• 接种培养： 将细胞悬液转移至预先加入 4 mL 完全培养基的 T25 培养瓶中，轻轻前后及左右晃动，使细胞均匀分布。

• 培养观察： 将培养瓶放入 37℃、5% CO₂ 培养箱中培养，定期观察 ID8-Luc细胞的贴壁、形态及增殖情况，并做好细胞来源、复苏日期和代次记录。

ID8-Luc细胞复苏注意事项

• 冻存细胞应快速解冻，避免在水浴中长时间放置，以减少温度变化对细胞活性的影响。

• ID8-Luc细胞复苏后应及时稀释并去除冻存液，降低 DMSO 对细胞的潜在毒性。

• 初次复苏建议使用 T25 培养瓶，不宜直接接种过大的培养容器。

• 复苏初期应重点观察细胞贴壁和恢复情况，不建议在细胞状态尚未稳定时立即进行抗生素筛选。

• 若 ID8-Luc细胞尚未充分贴壁，换液时应避免强力冲洗细胞层。

ID8-Luc细胞常规培养与传代

• 当 ID8-Luc细胞汇合度达到约 80%–90% 时，建议进行传代。常规传代比例为 1:3–1:4，复苏后的首次传代建议采用 1:3，以利于细胞恢复和增殖。

• 细胞状态观察： 在显微镜下观察 ID8-Luc细胞形态及生长情况，确认细胞无明显污染、形态正常且达到适宜传代密度。

• 弃去旧培养基： 吸弃培养瓶内原有培养基，避免移液器吸头直接接触细胞层。

• PBS 清洗： 加入 2–3 mL PBS，轻轻晃动培养瓶，使 PBS 覆盖整个细胞生长表面，然后吸弃。根据需要重复清洗 1–2 次，以去除残留血清。

• 加入胰酶： T25 培养瓶中加入约 1 mL 胰蛋白酶消化液，使其均匀覆盖细胞层，置于 37℃培养箱中消化约 1–2 分钟，并通过显微镜观察细胞变化。

• 终止消化： 当 ID8-Luc细胞逐渐变圆、细胞间连接松散，并在轻敲瓶壁后容易脱落时，立即加入约 2 mL 完全培养基终止消化。

• 收集细胞： 使用移液管轻柔吹打细胞，使其脱落并形成均匀的细胞悬液。将细胞悬液转移至离心管中，必要时使用少量 PBS 冲洗培养瓶，并合并收集。

• 离心处理： 室温下以 1100 rpm 离心 4 分钟，弃去上清液，保留细胞沉淀。

• 重悬细胞： 加入适量完全培养基，轻柔吹打使 ID8-Luc细胞充分分散。需要精确控制接种密度时，可进行细胞计数。

• 分瓶培养： 按照 1:3–1:4 的比例进行分瓶。例如，采用 1:3 传代时，将收集的细胞均匀分配至 3 个新的同规格培养瓶中，并补充适量完全培养基。

• 继续培养： 将培养瓶放入 37℃、5% CO₂ 培养箱中继续培养，定期观察 ID8-Luc细胞生长状态，根据实际增殖速度调整下一次传代比例。

传代注意事项

• ID8-Luc细胞的消化时间应根据实际脱落情况调整，避免过度消化造成细胞损伤。

• 胰酶浓度应以供应商说明或实验室验证条件为准，不宜自行假定固定浓度。

• 终止消化后应轻柔吹打，尽量避免细胞团块及机械性损伤。

• 传代比例需要结合 ID8-Luc细胞生长速度调整。若细胞增殖较快，可适当提高分瓶比例；若细胞恢复较慢，则应适当降低分瓶比例。

• 建议定期进行细胞计数、支原体检测，并记录细胞传代代次。

ID8-Luc细胞冻存操作步骤

• 收集细胞： 按照常规传代方法弃去旧培养基，PBS 清洗细胞，加入胰蛋白酶消化液，使细胞脱落后加入完全培养基终止消化。

• 细胞计数： 混匀后取样进行细胞计数和活率检测，确定 ID8-Luc细胞冻存数量。

• 离心处理： 将细胞悬液离心收集，参考条件为室温 1100 rpm、4 分钟。弃去上清液，保留细胞沉淀。

• 冻存液重悬： 加入预冷的冻存液，轻柔吹打，使 ID8-Luc细胞充分分散。参考冻存细胞密度为 1×10⁶–1×10⁷ cells/mL，实际冻存密度可结合细胞活率及复苏效果进行优化。

• 分装冻存： 将细胞悬液分装至无菌冻存管中，每管约 1 mL。冻存管应标注 ID8-Luc细胞名称、来源、批次、代次、冻存日期及细胞数量。

• 程序降温： 将冻存管放入适用的程序降温容器中，随后转入 −80℃冰箱进行降温。按照该产品说明书，建议分装后及时完成降温步骤，参考要求为 15 分钟内。

• 长期保存： 在 −80℃冰箱中程序降温过夜后，将冻存管转移至液氮储存系统进行长期保存，并做好冻存位置登记。

• 冻存质量验证： 新批次冻存后，建议抽取代表性冻存管进行复苏验证，观察 ID8-Luc细胞活率、贴壁及增殖情况，同时检测荧光素酶报告信号，确认细胞功能稳定。

冻存注意事项

• 冻存 ID8-Luc细胞应选择良好的生长状态，避免使用过度融合、衰老或状态异常的细胞。

• 冻存液中的 DMSO 具有一定细胞毒性，加入后应尽快完成分装及程序降温。

• 应采用适当的程序降温方式，避免将未经控制降温的冻存管直接投入液氮。

• 长期保存建议采用液氮储存，−80℃主要用于程序降温及短期保存。

• 建议建立低代次主细胞库和工作细胞库，减少长期连续传代对 ID8-Luc细胞生物学特性的影响。

ID8-Luc细胞培养质量控制

• 细胞形态： 定期观察 ID8-Luc细胞贴壁、生长密度及形态变化，发现异常应及时排查。

• 细胞活率： 在 ID8-Luc细胞复苏和冻存过程中进行细胞计数及活率检测，评价冻存和复苏效果。

• 污染检测： 定期开展支原体检测及必要的微生物污染检查。

• 传代管理： 记录 ID8-Luc细胞传代次数，尽量使用低代次细胞开展重要实验。

• 荧光素酶活性： 定期检测 ID8-Luc细胞的生物发光信号，确认报告基因表达情况，避免因长期培养或筛选状态变化导致信号减弱。

• 抗生素筛选： 如需维持报告基因表达，应依据 ID8-Luc细胞的实际抗性信息及供应商建议使用筛选药物，不应将不同来源细胞的筛选浓度直接通用。