L363细胞（人多发性骨髓瘤细胞系）

L-363细胞（L363）是一株人源恶性浆细胞细胞系，DSMZ保藏编号为ACC-49，Cellosaurus登记编号为CVCL_1357。L363细胞系建立于1977年，来源于一名36岁女性IgG型浆细胞白血病（plasma cell leukemia，PCL）患者的外周血。L363细胞属于血液系统恶性肿瘤细胞模型，在浆细胞肿瘤相关研究中具有较为广泛的应用价值。

从疾病来源来看，L363细胞的原始病例诊断为浆细胞白血病，因此严格意义上不宜将其直接描述为“来源于多发性骨髓瘤患者的细胞”。浆细胞白血病与多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）均属于来源于浆细胞的恶性血液系统肿瘤，在细胞分化特征、部分分子异常以及肿瘤生物学方面具有密切联系。L363细胞被广泛纳入多发性骨髓瘤细胞系研究体系，并常被用于多发性骨髓瘤相关实验。

L363细胞主要采用悬浮培养方式生长，通常以单个细胞或细胞聚集体形式存在，一般不形成典型的贴壁单层。培养状态良好时，细胞多呈圆形或卵圆形，体积相对较大，符合恶性浆细胞的形态学特点。随着培养密度增加，细胞可出现一定程度的聚集。其实际增殖速度会受到培养基、血清批次、接种密度、培养环境以及细胞传代状态等因素影响，进行细胞增殖或药物敏感性实验时，需要根据实际培养条件重新建立生长曲线。

L363细胞属于恶性浆细胞来源的肿瘤细胞模型，可用于研究浆细胞肿瘤细胞的增殖、存活、凋亡以及相关分子机制。历史研究资料显示，L-363为EBNA阴性，这一特征可用于其与部分EBV相关B细胞转化模型进行区分。

L363细胞具有明确的恶性浆细胞来源和多发性骨髓瘤相关研究价值，可应用于多种浆细胞肿瘤及血液肿瘤研究。在细胞生物学研究中，可用于观察肿瘤细胞增殖、细胞周期、凋亡及存活相关变化；在药物研究中，可用于抗肿瘤候选药物的体外活性评价，包括细胞活力、增殖抑制、细胞死亡及药物敏感性分析；在分子机制研究中，可用于研究浆细胞肿瘤相关基因、信号通路及肿瘤细胞生存机制。L363细胞也可作为多发性骨髓瘤相关靶点验证、肿瘤免疫及新型治疗策略研究的体外细胞模型。

L363细胞（人多发性骨髓瘤细胞系）特性特征

• L363细胞呈圆形或卵圆形，细胞体积相对较大，高密度培养时容易形成细胞团，具有浆细胞样特征，细胞对接种密度较敏感。

• 免疫表达特征：阳性表达：CD38、CD138、HLA-DR；阴性或低表达：CD3、CD19、CD20、CD10、CD34。

• 具有复杂的染色体数目和结构异常，可见涉及5q、8q、11q、14q和17p等区域的异常。

• 代表性基因变异包括：

• NRAS Q61H：与RAS/MAPK信号通路相关。

• PIK3CA E545K：与PI3K/AKT信号通路相关。

• TP53相关变异：与细胞周期、DNA损伤修复和凋亡相关。

• 部分研究显示L-363细胞具有较高的p18表达，可用于细胞周期调控研究。

• 病毒学特征：EBNA阴性，EBV PCR阴性。

• 主要应用：

• 多发性骨髓瘤和浆细胞白血病研究。

• 肿瘤细胞增殖、凋亡和细胞周期研究。

• 抗骨髓瘤药物筛选。

• 蛋白酶体抑制剂和免疫调节剂研究。

• RAS/MAPK、PI3K/AKT等信号通路研究。

• CD38、CD138和BCMA等靶点验证。

• 单克隆抗体、双特异性抗体、ADC和CAR-T研究。

• 骨髓瘤分子分型、基因组和转录组研究。

L363细胞（人多发性骨髓瘤细胞系）参数表

L363细胞（人多发性骨髓瘤细胞系）培养教程

一、L363细胞培养条件

L363细胞推荐使用RPMI-1640作为基础培养基，并加入15%热灭活胎牛血清（FBS），即85% RPMI-1640 + 15% FBS。配制好的L363细胞完全培养基应保持澄清，无明显沉淀、絮状物或异常颜色。培养基使用前可适当预温，以减少L363细胞复苏及传代过程中受到的温度刺激。

L363细胞推荐培养条件为：37℃、5% CO₂、饱和湿度。L363细胞属于悬浮细胞，培养过程中主要以单个细胞或细胞聚集体形式存在，一般不会形成典型的贴壁细胞层。因此，L363细胞的培养状态不能按照贴壁细胞的“融合度”进行判断，而应重点观察细胞密度、细胞形态、活率及增殖状态。

L363细胞日常培养建议维持在约0.2–0.5×10⁶ cells/mL。当细胞数量逐渐增加并接近较高培养密度时，应及时进行传代。通常L363细胞可按照1:2～1:3的比例进行传代，传代间隔一般为3–4天，具体时间需要根据实际细胞增殖速度进行调整。

二、L363细胞复苏

L363细胞复苏前，应提前准备37℃培养条件、预温的完全培养基、离心管、移液器以及培养瓶等。复苏时应尽量减少L363细胞在冻存状态和含DMSO环境中的暴露时间。

从液氮中取出L363细胞冻存管后，应迅速放入37℃水浴中进行解冻，并轻轻晃动冻存管，使冻存液均匀受热。待冻存液基本完全融化后立即取出，擦拭并消毒冻存管外壁。

将解冻后的L363细胞悬液缓慢加入预先准备好的完全培养基中，使冻存液中的DMSO得到充分稀释。随后根据实验室常规条件进行温和离心，弃去含DMSO的上清，并使用新鲜完全培养基轻柔重悬L363细胞。

重悬后建议立即进行细胞计数和活率检测，根据细胞数量调整培养密度，再将L363细胞转入培养瓶中进行培养。复苏后的L363细胞可能出现短时间内活率下降、部分细胞死亡或增殖速度减慢等情况，一般需要给予一定恢复时间。复苏后24–72小时重点观察L363细胞的形态、活率和细胞数量变化，待细胞恢复稳定增殖后再进行正常传代。

三、L363细胞日常培养及传代

L363细胞为悬浮生长，因此日常传代时不需要使用胰酶或EDTA进行消化。传代前可轻轻吹打或摇匀培养瓶，使L363细胞均匀分散于培养液中，然后取适量细胞悬液进行计数。

当L363细胞处于良好生长状态并达到适宜密度后，根据细胞计数结果计算传代所需的细胞悬液体积。按照约1:2～1:3的比例，将L363细胞接种至含新鲜完全培养基的培养瓶中，并将最终细胞密度调整至约0.2–0.5×10⁶ cells/mL范围。

例如，L363细胞培养密度较高时，可取一定比例的原培养液直接转入新的培养瓶，再补充新鲜完全培养基，使细胞浓度恢复到适宜范围。具体传代比例应根据L363细胞当前的增殖速度、活率和培养密度进行调整。

培养过程中应每天观察L363细胞状态，包括细胞形态、聚集程度、培养基颜色、细胞密度以及是否存在污染迹象。正常情况下，L363细胞主要呈圆形或卵圆形悬浮于培养基中，也可能形成一定程度的细胞团。若出现大量细胞碎片、细胞明显变形、培养基快速变色或细胞增殖异常，应及时检查培养条件及污染情况。

需要注意的是，L363细胞虽然可以在较高密度下继续生长，但不建议长期维持过高细胞密度。过度汇合或长期高密度培养可能造成营养物质消耗和代谢产物积累，从而影响L363细胞的活率及后续实验稳定性。因此，建议在细胞处于良好对数生长期时及时传代。

四、L363细胞冻存

L363细胞冻存应选择生长状态良好、处于对数生长期且细胞活率较高的细胞。建议避免使用长期高密度培养、明显衰老或状态异常的L363细胞进行冻存。冻存前可进行细胞计数、活率检测及支原体检测，以确保建立的L363细胞冻存库具有良好的质量。

L363细胞推荐采用含DMSO的冻存液进行保存，常用配方为：70%培养基 + 20% FBS + 10% DMSO

收集L363细胞悬液后进行温和离心，弃去培养上清，再使用预先配制好的冻存液轻柔重悬细胞。DMSO加入后具有一定细胞毒性，因此L363细胞与冻存液混合后，应尽量缩短室温放置时间，并及时进行程序降温。

将L363细胞按照合适的细胞数量分装至冻存管中，做好细胞名称、批次、代次及冻存日期等标识。随后采用规范的程序降温方式进行预冻，再转移至液氮环境中长期保存。长期保存过程中应避免反复冻融，以减少L363细胞活率下降及细胞状态改变。

五、L363细胞培养注意事项

L363细胞培养过程中，最重要的控制因素是细胞密度和细胞生长状态。由于L363细胞属于悬浮细胞，因此不能按照贴壁细胞的培养方式进行操作，也不需要通过胰酶消化完成传代。

L363细胞复苏时应遵循快速解冻、及时稀释DMSO的原则；日常培养应避免长期高密度状态，并根据细胞实际增殖情况及时传代；L363细胞冻存则应选择状态良好的对数期细胞，并采用规范的程序降温及液氮保存方法。

在进行药物筛选、细胞增殖、凋亡、流式细胞术或其他功能实验时，建议使用处于稳定对数生长期的L363细胞，并尽量保持不同实验组之间一致的细胞传代状态和接种密度，以降低细胞状态差异对实验结果造成的影响。实际培养参数可根据细胞来源、培养基批次和实验室条件进行适当优化。