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货号：STM-CL-8101 规格：1×10⁶cells/T25培养瓶或1mL冻存管
CHO-K1细胞（仓鼠卵巢细胞亚株）
- 来源：卵巢
- 细胞特征：贴壁细胞 , 上皮细胞样
- 培养基：Ham's F-12K＋10% FBS＋1% P/S
- 其他：CHO细胞是生产治疗性蛋白质的首选宿主，市场上超过70%的蛋白质药物均由CHO细胞生产
CHO-K1细胞（Chinese Hamster Ovary K1），中国仓鼠卵巢细胞K1亚克隆，源自亲本CHO细胞系。CHO-K1细胞系于1957年由Theodore Puck在波士顿癌症研究基金会实验室首次分离，来源为成年雌性中国仓鼠的卵巢组织。CHO-K1细胞自1948年起在美国用于多种生物医学研究，随着亚克隆CHO-K1的分离，逐渐成为实验室研究和工业生产中的重要工具。
CHO-K1细胞广泛应用于生物技术和医药研究，尤其适合作为蛋白质药物生产和重组蛋白表达的宿主系统。1968年的研究还揭示了CHO-K1细胞缺乏合成甘氨酸的关键基因，因此需要在培养基中额外补充脯氨酸以维持其正常生长。
CHO-K1细胞特性特征
倍体性：CHO-K1细胞的染色体组成为2n=22，属于亚二倍体（hypodiploid），表现出一定的遗传不稳定性。
营养需求：CHO-K1细胞需要培养基中添加脯氨酸以支持其生长，因为它缺乏合成脯氨酸的能力。
培养条件：适合在无血清或无动物成分的培养基中生长，能够在高密度下进行悬浮培养。
病毒感染：CHO-K1细胞对水疱性口炎病毒（包括印第安纳州和格拉斯哥株）及盖塔病毒具有易感性。
基因组稳定性：CHO-K1细胞的基因组可能经历了大规模的染色体重排，导致不同细胞系间染色体数目不一致。
翻译后修饰能力：CHO-K1细胞能够进行复杂的翻译后修饰，生成与人类蛋白质相似的糖蛋白，是成为生产生物仿制药的理想宿主。
组蛋白表达：CHO-K1细胞常用于重组蛋白的表达，能够有效地插入复杂的N-连接聚糖，有助于蛋白质折叠和运输。其糖基化模式接近人类细胞，这提高了蛋白质在体内的稳定性和活性。
高产能力：CHO-K1细胞系在大规模培养中表现出高水平的蛋白质表达，适合用于工业化生产。
遗传背景：CHO-K1细胞缺乏甘氨酸生物合成所需的基因，这一遗传缺陷使其依赖于外源性的脯氨酸。此外，CHO-K1细胞与大多数人类硫酸乙酰肝素葡糖胺O-磺基转移酶有同源基因，这表明其在某些代谢途径上与人类存在相似性
CHO-K1细胞参数表
| 细胞名称 | CHO-K1细胞（仓鼠卵巢细胞亚株） |
| 细胞别称 | CHO K1; CHOK1; CHO cell clone K1; GM15452 |
| 种属来源 | 中国仓鼠（Cricetulus griseus） |
| 组织来源 | 卵巢 |
| 性别 | 雌 |
| 细胞形态 | 上皮细胞样，贴壁生长 |
| 倍增时间 | ~24小时 |
| 染色体组数 | 2n=22（亚二倍体） |
| 生物安全等级 | 1 |
| 支原体检测 | 无 |
| 细胞规格 | 1×10^6 cells/T25培养瓶或冻存管包装 |
| 培养基 | F-12K + 10% 胎牛血清（FBS） |
| 培养条件 | 气相：95%空气 + 5% CO₂；温度：37℃ |
| 传代密度 | 80%-90% |
| 传代比例 | 1:2至1:5 |
| 冻存条件 | 无血清冻存液，液氮储存 |
| 病毒易感性 | 水疱性口炎病毒、盖塔病毒 |
| 主要应用领域 | 工业生物技术、毒理学研究、重组蛋白表达 |
| 生长培养基 | Ham's F-12K＋10% FBS＋1% P/S |
| 基因组稳定性 | 存在遗传不稳定性，可能具有不同的染色体数目，已知有21条染色体。 |
| 糖基化能力 | 能够进行复杂的翻译后修饰，生成与人类蛋白质相似的糖蛋白。 |
| 脯氨酸需求 | 缺乏脯氨酸合成基因，需要在培养基中添加L-脯氨酸才能生长。 |
| 冻存液配方 | 无血清冻存液 |
| 应用特性 | CHO-K1细胞是市场上超过70%的蛋白质药物的首选制造宿主。 |
| 能够在无血清悬浮培养中以高密度生长，适合大规模生产。 | |
| 表达的重组蛋白在结构和功能上接近天然蛋白。 |
培养教程
CHO-K1仓鼠卵巢细胞亚株培养教程
CHO-K1细胞复苏
将CHO-K1细胞冻存管在37℃水浴中快速解冻，轻轻摇晃以防细胞损伤。
将解冻后的CHO-K1细胞悬液加入4-6 mL完全培养基中，混合均匀。
在1000 RPM下离心3-5分钟，弃去上清液，以确保CHO-K1细胞活性。
用新配制的培养基重悬CHO-K1细胞，随后将细胞悬液加入6-8 mL完全培养基的T25培养瓶中，置于37℃培养箱中培养过夜。
第二天观察CHO-K1细胞的贴壁和增殖情况，确保CHO-K1细胞的复苏顺利。
CHO-K1细胞传代
当CHO-K1细胞密度达到80%-90%时，准备进行传代操作。
方法一： 收集CHO-K1细胞后离心4分钟，去上清，用1-2 mL培养基重悬CHO-K1细胞，按1:2至1:5比例分至新的培养瓶中，补充8 mL培养基。
方法二： 半数换液方式，弃去培养基的一半，轻轻悬起CHO-K1细胞，将悬液按1:2至1:3的比例分装至新皿或瓶中，加8 mL培养基继续培养。
CHO-K1细胞无血清驯化
逐步降低血清浓度
将贴壁的CHO-K1细胞换液，加入15 mL含血清的培养基和15 mL无血清培养基的混合液。
每隔两天替换一半培养基，并补充等量的无血清CHO-K1细胞培养基，逐步降低胎牛血清浓度至低于1%。
血清浓度逐步降低
逐步降低CHO-K1细胞培养中的血清浓度至5%、2.5%、1.25%、0.625%、0%，最后在无血清的基础培养基（B001）中继续培养CHO-K1细胞。
获得悬浮CHO-K1细胞
当CHO-K1细胞密度在无血清培养基中达到5×10⁶ cells/mL时，即可获得悬浮状态的CHO-K1细胞。
CHO-K1细胞冻存
准备CHO-K1细胞悬液
收集消化后的CHO-K1细胞，用血球计数板计数，以确定冻存密度。推荐冻存浓度为1×10⁶至1×10⁷个活细胞/mL。
在1000 RPM下离心3-5分钟，去上清液后，用配制好的冻存液重悬CHO-K1细胞。
每管分装1 mL冻存液（含1×10⁶至1×10⁷个CHO-K1细胞），并标注细胞名称、代次及日期。
将CHO-K1细胞冻存管放入程序降温盒中，在-80℃冷冻过夜，随后转移至液氮罐中长期保存。
CHO-K1细胞培养注意事项
所有操作应在生物安全柜中进行，防止CHO-K1细胞污染。
保持培养箱湿度在70%-80%，气相为95%空气和5% CO₂。
定期记录CHO-K1细胞状态和密度，以确保实验数据的连续性和准确性。
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