CHO细胞（中国仓鼠卵巢细胞系）

CHO细胞（中国仓鼠卵巢细胞）由Theodore T. Puck于1957年首次从中国仓鼠（Cricetulus griseus）卵巢分离，其快速增殖和高效蛋白表达特性而广泛用于生物医药领域，尤其是治疗性蛋白质的生产。CHO细胞具有独特的上皮细胞特性，能够在适应后进行贴壁或悬浮培养，且其遗传不稳定性带来多样的表达水平，常用于基因工程和蛋白质生产。

CHO细胞已衍生出多种变异体，包括未改造的CHO-K1、缺乏二氢叶酸还原酶的CHO-DG44和CHO-DXB11等，它们适用于不同的生物制药和蛋白质工程应用。

CHO细胞特性特征

• 糖基化能力：CHO细胞擅长进行复杂的翻译后修饰，如N-连接糖基化，使其生产的重组蛋白在功能和稳定性上更接近人源蛋白，提高了生物相容性和药效。其糖基化模式与人类细胞相似，使得其生产的蛋白质在结构和功能上更接近天然蛋白。
  

• 非分泌型细胞：CHO细胞本身很少分泌内源蛋白，因此在目标蛋白的分离和纯化过程中具有优势。

• 遗传不稳定性：CHO细胞具有较低的染色体数目（通常为22条），且存在遗传不稳定性。
  

• 脯氨酸缺陷：CHO细胞缺乏脯氨酸合成基因，无法将谷氨酸转变为谷氨酸-半醛，因此在培养基中需要添加L-脯氨酸以支持其生长。

• 高效表达系统：CHO细胞能够高效扩增和表达重组基因，适合用于生产复杂的生物大分子，如单克隆抗体和其他治疗性蛋白。
  

• 产物分泌功能：CHO细胞能够有效地将表达的蛋白质分泌到培养基中，便于后续的分离和纯化。

CHO细胞参数表

CHO细胞－仓鼠卵巢细胞系培养教程

CHO细胞复苏

• 预热培养基：将水浴锅预热至37℃，准备5-10 mL的完全培养基，以适应CHO细胞生长的温度。

• 细胞解冻：将冻存的CHO细胞迅速放入37℃水浴中解冻，轻轻摇动以加速融化（约1-1.5分钟）。

• 消毒：解冻后，用75%乙醇擦拭离心管外壁并转移至超净工作台，保持CHO细胞无菌环境。

• 离心：将解冻的CHO细胞移入含5-10 mL培养基的离心管中，以800-1000 rpm离心5分钟，去除冷冻保护剂。

• 重悬：弃去上清，加入新鲜培养基重悬CHO细胞，确保细胞均匀分散。

• 接种：将CHO细胞转移至培养瓶中，做好标记（包括CHO细胞系名称、代次、日期等信息），并置于37℃、5% CO₂的培养箱中培养。

CHO细胞传代

• 观察生长状态：当CHO细胞密度达到80%-90%时，可进行传代。

• 更换培养液：弃去旧培养液，用PBS洗涤CHO细胞1-2次以去除血清残留。

• 消化细胞：加入1 mL的0.25%胰蛋白酶，置于37℃数分钟，观察CHO细胞形态。当细胞呈圆形并逐渐脱落时，立即终止消化。

• 终止消化：加入含血清的培养基中和胰蛋白酶。

• 离心与重悬：轻轻拍打瓶壁使CHO细胞完全脱落，移至离心管中，800-1000 rpm离心5分钟，弃去上清。

• 接种新瓶：根据需要稀释CHO细胞浓度，将其移至新的培养瓶中继续培养。

血清逐步减少法（适用于无血清培养）

• 如果实验需要无血清培养环境，可以通过逐步降低血清浓度的方式适应CHO细胞生长：

• 初始使用10%血清的培养基，然后逐步减少至5%、2.5%，直至CHO细胞适应低血清环境。

注意事项

• 避免过度消化：在使用胰蛋白酶消化时应密切观察CHO细胞形态，以避免因过度消化导致细胞损伤。

• 无菌操作：CHO细胞培养全程需严格无菌操作，以防止污染。

• 监控环境：确保pH值和溶氧量适宜。过高或过低的二氧化碳浓度和pH值均可能影响CHO细胞的生长。

• 温和混匀：重悬和接种时动作应轻柔，以防CHO细胞机械损伤。