GP2d细胞（人结肠癌细胞） （暂不提供）

GP2d细胞系来源于一名71岁女性的结肠癌组织。该患者在经历了结肠癌手术切除后，发生了局部复发，且该肿瘤被诊断为Duke B级低分化腺癌。在手术前，患者未接受过化疗或放疗，同时具有显著的家族结肠癌病史，包括两名一级亲属在55岁以下因结肠癌去世。

GP2d细胞与GP5d细胞系均源自同一腺癌，但二者在细胞形态上有所不同，尽管具有类似的遗传变异。GP2d细胞系显示出5号染色体14q至22q区域的缺失，以及10q11和10q21区域的反向重复。相较于GP5d细胞，GP2d细胞在表皮生长因子（EGF）、转化生长因子α（TGFα）和胰岛素的存在下表现出更强的生长反应。此外，GP2d细胞的mRNA中安非他酮的表达水平显著高于GP5d细胞，后者几乎无法检测到此物质的存在。

GP2d细胞分子特征

• 基因组特征：GP2d细胞在5号染色体的14q至22q区域存在间隙缺失，同时在10q11和10q21区域有倒置重复。这些基因组变化与结肠癌的肿瘤进展模式一致。
  

• 基因表达：GP2d细胞中安非他酮的mRNA表达量较高，而在GP5d细胞中几乎检测不到。这表明GP2d细胞在某些生长因子（如EGF、TGFα和胰岛素）刺激下表现出显著的生长反应。

GP2d细胞参数表

GP2d人结肠癌细胞培养教程

细胞复苏

• 取出GP2d细胞的冻存管，迅速放入37℃水浴中，轻轻摇晃约1-2分钟，直至GP2d细胞完全解冻。
  

• 将解冻的1 mL GP2d细胞悬液加入4 mL完全培养基（DMEM + 10% FBS）中，轻轻混合均匀。
  

• 以1000 RPM的速度离心4分钟，弃去上清液。
  

• 加入1-2 mL完全培养基，轻轻吹打以重悬GP2d细胞。
  

• 将GP2d细胞悬液转移至T25培养瓶中，放入37℃、5% CO₂的培养箱中培养过夜。第二天检查GP2d细胞的状态和密度。
  

细胞传代

• 当GP2d细胞密度达到80%-90%时，准备进行传代。
  

• 弃去培养基，用不含钙、镁离子的PBS洗涤GP2d细胞1-2次。
  

• 加入1 mL消化液（0.25% Trypsin-0.53 mM EDTA），放置于37℃培养箱中消化1-2分钟，直至GP2d细胞大部分变圆并脱落。
  

• 迅速加入少量完全培养基以终止消化。
  

• 按6-8 mL/瓶的比例补加培养基，轻轻混合后在1000 RPM下离心4分钟，弃去上清液。
  

• 加入1-2 mL培养基重悬GP2d细胞，轻轻吹打均匀后，将细胞悬液按1:2或1:3的比例分配到新的培养瓶中，并补加8 mL培养基。
  

细胞冻存

• 确保GP2d细胞处于对数生长期时，弃去培养基，用PBS清洗GP2d细胞一次。
  

• 加入1 mL胰酶，待GP2d细胞脱落后，加入1 mL含血清的培养基终止消化。使用血球计数板计数细胞。
  

• 在1000 RPM下离心4分钟，弃去上清液。根据细胞数量加入FBS和DMSO，DMSO的终浓度应为10%，轻轻混合均匀。
  

• 每支冻存管中加入1 mL GP2d细胞悬液，标识清楚。
  

• 将冻存管包好，放置于4℃冰箱中2小时，然后转移至-20℃冰箱中2小时，再放入-80℃冰箱中过夜，最后转移至液氮中储存。
  

注意事项

• 细胞状态：确保GP2d细胞在复苏前处于对数生长期，避免过密或出现连片状态。

• 消化控制：消化时间应适中，避免胰酶过度消化，吹打时要轻柔以减少泡沫产生。

• 冻存液：冻存液中FBS的浓度可以根据实验需要调整，通常建议使用10%-20% FBS。

• 质量检测：定期检查GP2d细胞是否有细菌、真菌或支原体污染，以确保细胞培养的稳定性。