OVCAR8/Luc细胞（人卵巢癌腺癌细胞Luc荧光素酶标记）

OVCAR-8/Luc是携带荧光素酶基因（LUC）的稳定转染人卵巢癌腺癌细胞系，LUC基因是通过慢病毒转染方法引入的。OVCAR8/luc细胞能够发出荧光信号，但随着细胞传代次数的增加，荧光强度可能逐渐减弱。为了在实验中维持荧光信号的强度，可以通过嘌呤霉素进行筛选。建议在收到细胞后至少传代三次并冻存留种后，再开始筛选。初次筛选时，建议使用含有终浓度为1 μg/mL嘌呤霉素的完全培养基进行培养。如果没有出现细胞漂浮或漂浮细胞数量较少，可以逐步提高嘌呤霉素的浓度至2 μg/mL，继续筛选，逐步增加至最高浓度5 μg/mL。如果筛选过程中漂浮细胞超过60%，应停止筛选，改用不含药的培养基，待细胞密度达到80%时，再继续使用同样浓度的嘌呤霉素筛选。筛选可以停止，当细胞在5 μg/mL的嘌呤霉素条件下正常增殖时，可以改为不含药的完全培养基进行常规培养。

OVCAR-8细胞系的来源是一名64岁高级别卵巢浆液性腺癌患者，这种细胞系属于NCI-60系列，广泛应用于药物筛选及分子靶点研究。通过慢病毒转染荧光素酶基因，OVCAR-8/Luc细胞具备了荧光标记能力，因而在生物成像及药物筛选研究中具有重要应用价值。

OVCAR8/Luc细胞特性特征

• 为维持荧光素酶（LUC）标记的强度，建议在OVCAR8培养基中添加嘌呤霉素进行筛选。
  

• OVCAR8细胞系可以通过慢病毒转染技术引入荧光素酶基因（LUC），使其具有荧光特性，适用于生物成像和药物筛选研究。

• OVCAR8细胞表达与卵巢癌相关的特定生物标志物，如CA125、HER2/neu、雌激素受体（ER）和孕激素受体（PR）。

• OVCAR8细胞可能表现出与药物抗性相关的特定基因或蛋白质表达模式。

• OVCAR-8细胞广泛用于卵巢癌的生物学研究、药物筛选及耐药机制的研究，提供了一个重要的实验模型

OVCAR8/Luc细胞参数表

OVCAR8/Luc人卵巢癌腺癌细胞Luc荧光素酶标记培养教程

OVCAR8细胞的接收与处理

• 如果OVCAR8细胞以冻存管形式运输，应在干冰中运送，接收到后可立即置于-80°C冰箱保存，或直接进行细胞复苏。
  

• 若以T25培养瓶运输，OVCAR8细胞通常在常温下运输。收到后需在37°C培养箱中静置2-3小时，以稳定细胞状态。

OVCAR8细胞复苏

• 冻存管：将OVCAR8细胞冻存管置于37°C水浴中快速复苏，通常需要1-2分钟，直到细胞完全融化为止。
  

• T25培养瓶：直接将其置于37°C培养箱中，观察OVCAR8细胞状态。

• 外部消毒：使用75%酒精擦拭OVCAR8细胞冻存管或培养瓶外壁，确保操作无菌。

• 复苏细胞：更换培养基：复苏后，将OVCAR8细胞转移至含10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素-链霉素（P/S）的RPMI-1640完全培养基中，轻轻混匀后，进行离心以去除DMSO。

OVCAR8细胞传代

• 传代时机：当OVCAR8细胞生长至80%-90%汇合时进行传代。

• 弃去旧培养基：用PBS清洗OVCAR8细胞一次，以去除残留的血清。
  

• 细胞消化：加入0.25%胰蛋白酶，适量（约1 mL）覆盖OVCAR8细胞，轻轻摇晃培养瓶，然后置于37°C培养箱中1-2分钟，直到细胞完全脱落。

• 终止消化：用含FBS的完全培养基终止消化，轻轻吹打使OVCAR8细胞充分悬浮。

• 离心：以1000 rpm离心5分钟，去除上清液。

• 重悬细胞：用新鲜培养基重悬OVCAR8细胞，以1:2至1:3的比例接种至新的培养瓶中。

OVCAR-8/Luc细胞在不同浓度嘌呤霉素下的反应

• 1 μg/mL：细胞适应良好，生长正常，荧光强度开始维持。

• 2 μg/mL：细胞继续生长，荧光强度有所提升，适合继续筛选。

• 3 μg/mL：细胞生长依然正常，荧光强度稳定，适合长期培养。

• 4 μg/mL：细胞增殖速度可能减缓，需观察细胞状态。

• 5 μg/mL：若细胞在此浓度下仍能正常增殖，表明细胞对嘌呤霉素的耐受性良好，此时可停止筛选，转为使用不含药物的完全培养基

维持OVCAR8细胞荧光强度的筛选方法

• 初次筛选时，在培养基中加入1 μg/mL的嘌呤霉素。当OVCAR8细胞状态良好且漂浮细胞较少时，逐步增加浓度至2 μg/mL、3 μg/mL，最终达到5 μg/mL。
  

• 如果筛选过程中漂浮OVCAR8细胞超过60%，应停止筛选，改用不含嘌呤霉素的培养基培养。待细胞密度恢复到80%左右后，可再次进行筛选。

• 当OVCAR8细胞能够在5 μg/mL的嘌呤霉素条件下正常增殖时，可以停止筛选，改为使用不含药物的完全培养基进行后续培养。