
12z细胞(永生化人子宫内膜异位症细胞)
- 来源:子宫内膜
- 细胞特征:贴壁细胞 , 上皮细胞样
- 培养基:DMEM-F12+ FBS 10% +P/S 1%
- 其他:12z细胞表达多种与子宫内膜异位症相关的标志物,如SV40T、细胞角蛋白、波形蛋白、N-钙黏蛋白、雌激素受体α和β、孕激素受体及芳香化酶P450
12Z细胞系是一种源自37岁女性患者子宫内膜组织的永生化人子宫内膜异位症细胞系。在患者腹腔镜手术中提取了子宫内膜样组织,随后通过SV40病毒转染使细胞获得永生化特性,能够在体外条件下无限增殖。12Z细胞属于转化的上皮样细胞,是研究子宫内膜异位症病理机制的重要模型。12Z细胞广泛用于与子宫内膜异位症相关的基因功能研究、疾病标志物的鉴定以及潜在治疗靶点的探索,具有重要的科研价值。
12z细胞特性特征
基因表达:12Z细胞系表达多种与子宫内膜异位症相关的基因和标志物,包括雌激素受体α和β、孕激素受体、N-钙粘蛋白等。
细胞标志物:12Z细胞表现出体内可见的子宫内膜异位症病变标志物的表达,包括SV40T抗原和其他上皮细胞特征。
12z永生化人子宫内膜异位症细胞参数表
细胞名称 | 12z细胞(永生化人子宫内膜异位症细胞系) |
细胞别称 | 12Z |
来源 | 37岁女性患者的子宫内膜组织 |
细胞类型 | 转化细胞系,上皮样细胞 |
倍增时间 | 约31小时 |
组织来源 | 子宫内膜异位症 |
生物安全等级 | BSL-2 |
培养基 | DMEM/F12 + 10% 胎牛血清 + 1% P/S |
培养条件 | 37°C,5% CO₂ |
pH值 | 7.2-7.4 |
气体组成 | 95%空气 + 5%二氧化碳 |
培养瓶规格 | T25、T75等 |
培养基更换频率 | 每2-3天更换一次 |
传代比例 | 1:2至1:4(首次传代建议1:2) |
消化方法 | 使用0.25%胰蛋白酶(含EDTA)消化1-2分钟 |
冻存条件 | 基础培养基60% + 胎牛血清30% + DMSO10% |
冻存液 | 推荐使用无血清冻存液 |
储存方式 | 液氮中长期保存 |
支原体检测 | 阴性 |
冻存有效期 | 长期保存,建议每3个月检测一次 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
侵袭能力标志物 | N-钙粘蛋白阳性 |
培养教程
12z细胞(永生化人子宫内膜异位症细胞)培养教程
12Z细胞解冻
准备预热至37°C的完全培养基(如DMEM/F12)以及T25培养瓶。
使用37°C水浴快速解冻12Z细胞冻存管,避免细胞长时间暴露在非理想环境中。
将冻存的12Z细胞冻存管从液氮中取出,迅速放入37°C水浴中,轻轻摇晃,直至细胞完全解冻(约1-2分钟)。
将解冻后的细胞悬液转移到盛有9 mL预热培养基的离心管中,以125 × g离心7分钟,去除冷冻保护剂。
弃去上清液,将细胞重悬于5 mL完全培养基中,转移至T25培养瓶,放置于37°C、5% CO₂培养箱中培养。
每天通过显微镜观察12Z细胞的形态、贴壁及汇合情况,确保其逐步恢复到健康状态。
12Z细胞培养
采用DMEM/F12培养基,加入10%胎牛血清(FBS)和1%青霉素-链霉素(P/S)。
在37°C、5% CO₂的恒温培养箱中培养12Z细胞。
每2-3天更换一次培养基,去除代谢废物并补充营养,保持12Z细胞的生长状态。
12Z细胞传代
当12Z细胞汇合度达到80%-90%时进行传代操作。
去除旧的培养基,用无钙镁PBS缓冲液洗涤12Z细胞,去除残余血清。
添加2-4 mL胰蛋白酶-EDTA溶液,置于37°C培养箱中消化2-5分钟。
观察细胞间隙变大时,终止消化,加入完全培养基中和胰蛋白酶。
轻轻吹打瓶壁使12Z细胞脱落,制成细胞悬液。
使用血球计数板计数细胞后,根据1:3至1:5的比例将细胞接种至新培养瓶中。
12Z细胞冻存
配制含5% DMSO和95%完全培养基的冷冻保存液,确保细胞在低温下的存活率。
收集对数生长期的12Z细胞,以125 × g离心7分钟,弃去上清液。
将细胞重悬于冷冻培养基中,调整细胞浓度为2-5 × 10⁶个/mL。
分装1 mL细胞悬液至冻存管,逐步降温(如使用程序降温盒)后,存放于-80°C过夜,最终转移至液氮中长期保存。
注意事项
无菌操作:操作过程中全程保持无菌环境,避免12Z细胞污染。
记录观察:定期记录12Z细胞的形态、贴壁状态及生长速率。
培养基质量:确保使用优质胎牛血清和培养基,以提供充足营养。
相关资料
STR鉴定及相关
参考文献
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