hesc-sv40细胞（人子宫内膜基质细胞）永生化细胞系

hesc-sv40细胞 子宫内膜基质细胞（endometrial stromal cells）来源于人子宫内膜组织的间质部分，是内膜微环境中的关键组成细胞。在生理条件下，子宫内膜基质细胞参与月经周期中的周期性增殖、分化及组织重构过程，并在妊娠建立阶段转化为蜕膜细胞（decidual stromal cells），在胚胎着床及胎盘形成中发挥重要调控作用。

子宫内膜基质细胞永生化，是指通过外源性遗传操作（如导入 hTERT、SV40 large T antigen 等相关元件），使原本存在复制寿命限制的原代细胞突破衰老屏障，从而获得持续增殖能力并建立稳定体外培养模型。
子宫内膜基质细胞永生化根据组织来源不同，可分为：在位子宫内膜来源：取自子宫腔内正常位置的内膜组织；异位病灶来源：来源于子宫内膜异位症相关病灶（如卵巢或腹膜异位组织）。

人子宫内膜基质细胞永生化细胞系特性特征

• 间质表型保留：保留子宫内膜基质细胞的基本间质特征，而非上皮样特征。

• Vimentin 常阳性：常表现为波形蛋白高表达。

• Cytokeratin 18 通常低表达。

• 保留激素受体表达：通常仍可表达雌激素受体（ER）和孕激素受体（PR）。

• 保留激素反应性：对雌激素、孕激素等刺激仍有一定响应能力。

• 具有蜕膜化潜能：在特定诱导条件下，可表现出蜕膜化相关反应。

• 蜕膜化标志物可诱导表达：如 PRL、IGFBP-1、PAI-1 等相关分子可被检测到。

• 细胞外基质相关分子可表达：如纤连蛋白、层粘连蛋白、IV型胶原等常与其功能状态相关。

• 核型相对稳定：可保持较稳定的染色体背景。

• 致瘤性较弱：一般不表现出明显恶性转化，更适合作为功能性模型细胞。

• 适合体外模型研究：常用于子宫内膜生理、蜕膜化、激素调控、炎症反应和子宫内膜异位症机制研究。

hesc-sv40细胞参数表

人子宫内膜基质细胞永生化细胞系培养教程

细胞复苏（Thawing）

1. 实验准备

• 将完全培养基预热至室温或37℃；

• 准备PBS、无菌离心管、培养瓶及相关耗材；

• 预先在培养瓶中加入适量培养基，以便HESC-SV40细胞快速接种；

• 全程在无菌环境中操作。

2. 快速解冻

• 从液氮中取出HESC-SV40细胞冻存管；

• 立即置于37℃水浴中轻轻摇动，约1–2分钟完全融化；

• 避免高温暴露时间过长，以减少细胞损伤。

3. 去除冻存液

• 将细胞悬液转入含培养基的离心管中稀释；

• 1000 rpm离心3–5分钟；

• 弃去上清，去除含DMSO的冻存液，保护HESC-SV40细胞活性。

4. 重悬接种

• 使用新鲜培养基轻柔重悬细胞；

• 接种至培养瓶中并补足培养基；

• 轻轻混匀，使HESC-SV40细胞均匀分布。

5. 培养恢复

• 将HESC-SV40细胞置于37℃、5% CO₂培养箱中培养；

• 24–72小时内根据状态更换培养基；

• 观察细胞贴壁及形态恢复情况。

6. 状态观察

• 正常HESC-SV40细胞呈梭形或成纤维样；

• 初期可见少量漂浮细胞碎片；

• 若密度较低，可延长恢复时间。

细胞传代（Subculture）

1. 传代时机

• 当HESC-SV40细胞融合度达80%–90%时进行；

• 避免过度融合导致状态下降。

2. PBS清洗

• 吸弃旧培养基；

• 使用无钙镁PBS清洗1–2次，提高消化效率。

3. 胰酶消化

• 加入0.25% Trypsin-EDTA消化液；

• 37℃消化1–3分钟；

• 显微镜观察HESC-SV40细胞逐渐变圆脱落。

4. 终止消化

• 加入完全培养基终止反应；

• 轻柔吹打使HESC-SV40细胞形成单细胞悬液。

5. 离心重悬

• 1000 rpm离心3–5分钟；

• 弃上清后重悬细胞。

6. 分瓶接种

• 按1:2–1:4比例分瓶；

• 补充培养基后继续培养；

• 根据HESC-SV40细胞增殖情况调整比例。

7. 传代后观察

• 24小时观察贴壁情况；

• 后续每2–3天换液；

• 维持HESC-SV40细胞良好形态和增殖状态。

细胞冻存（Cryopreservation）

1. 冻存时机

• 选择对数生长期的HESC-SV40细胞；

• 确保无污染、形态正常。

2. 细胞收集

• 按传代流程消化并收集HESC-SV40细胞；

• 离心后可用PBS洗涤一次。

3. 冻存液准备

• 推荐配方：90% FBS + 10% DMSO；

• 或使用商业冻存液；

• 冻存液需预冷。

4. 浓度调整

• 将HESC-SV40细胞浓度调整至5×10⁶–1×10⁷ cells/mL；

• 混匀时避免剧烈操作。

5. 分装标记

• 每管加入约1 mL细胞悬液；

• 标注细胞名称（HESC-SV40细胞）、代次及日期。

6. 程序降温

• 置于-80℃约24小时；

• 随后转入液氮长期保存；

• 保证HESC-SV40细胞冻存过程平稳降温。

7. 冻存管理

• 建立台账记录；

• 避免反复冻融影响HESC-SV40细胞活性。

关键注意事项

• HESC-SV40细胞复苏过程中需尽量缩短DMSO暴露时间；

• 控制胰酶消化时间，避免损伤细胞表面结构；

• 传代比例应依据HESC-SV40细胞生长速度动态调整；

• 新复苏的HESC-SV40细胞建议稳定传代1–2代后再用于实验；

• 建议定期检测污染（如支原体），确保细胞质量。