RD细胞（人恶性胚胎横纹肌瘤细胞）

RD细胞系是从一名3岁女性患者的骨盆恶性胚胎横纹肌肉瘤中分离出的细胞，由McAllister等人在1969年首次建立。RD细胞是源自肌肉组织的典型大型、多核、纺锤形细胞，主要应用于癌症研究和病毒学检测。

RD细胞在49和50的超二倍体双峰茎系数内的不稳定性。根据ATCC的初始种子库，22个细胞显示染色体关联，15个细胞具有微染色体，2个细胞存在片段，2个细胞出现断裂，2个没有彩色间隙，1个细胞具备二次收缩现象。RD细胞具备遗传不稳定性。

RD人恶性胚胎横纹肌瘤细胞特征特性

• RD细胞能够产生肌红蛋白和肌球蛋白ATPase，这些是横纹肌细胞的典型标志物，反映了其肌肉来源的特性。
  

• RD细胞常见多核细胞，显示出肿瘤细胞的多样性和复杂性；细胞形态呈纺锤形，具有典型的肌肉细胞特征。

• 蛋白质表达：RD细胞在培养过程中会表达多种与肌肉细胞相关的蛋白质，包括肌红蛋白和肌球蛋白ATPase。
  

• 贴壁生长：RD细胞主要为贴壁生长。

• 基因突变：作为恶性胚胎横纹肌肉瘤细胞，RD细胞携带多种基因突变。

• 同工酶：G6PD，B

• 病毒易感性：人脊髓灰质炎病毒1；水疱性口炎，格拉斯哥（印第安纳州）；水疱性口炎，奥赛（印第安纳州）；单纯疱疹病毒；痘苗病毒

RD细胞系参数表

RD人恶性胚胎横纹肌瘤细胞系培养教程

RD细胞复苏

• 将含有RD细胞悬液的冻存管放入37℃水浴中快速解冻，约1-2分钟。
  

• 将1 mL RD细胞悬液转移至含4 mL预热培养基的离心管中，轻轻混匀。
  

• 以1000 rpm离心3分钟，弃去上清。
  

• 用1-2 mL新鲜培养基重悬RD细胞。
  

• 将RD细胞悬液转移至含8-10 mL培养基的培养瓶中，在37℃、5% CO2条件下培养过夜。
  

• 次日换液并显微镜下观察RD细胞状态，确保RD细胞贴壁良好并无污染。
  

RD细胞传代

• 细胞密度：当RD细胞密度达到80-90%时进行传代。

• 弃去旧培养液，用PBS缓冲液洗涤RD细胞1-2次。
  

• 加入0.25% Trypsin-0.53mM EDTA消化液，置于37℃下消化约1分钟。

• 在显微镜下观察，RD细胞大部分变圆并开始脱落时，加入少量培养基终止消化。
  

• 以1000 rpm离心4分钟，弃去上清，用1-2 mL新鲜培养基重悬RD细胞。
  

• 按1:2或1:4比例将RD细胞接种到新的培养瓶中，加入足够培养基并在标准条件下培养。
  

RD细胞冻存

• 收集对数生长期的RD细胞。
  

• 以1000 rpm离心5分钟，弃去上清。
  

• 用预冷的冻存液（90% FBS + 10% DMSO）重悬RD细胞，调整密度至1×10^6/mL。

• 将RD细胞悬液分装至冻存管中，使用程序降温盒在-80℃降温24小时。
  

• 将冻存管转移至液氮中进行长期保存。
  

提高RD细胞培养效率的策略

• 优化培养基：确保使用高质量的DMEM培养基，定期更换以提供RD细胞充足的营养和生长因子。

• 控制培养环境：严格控制培养温度、CO2浓度和湿度，保持RD细胞环境稳定。

• 定期传代：及时传代以避免RD细胞过度拥挤，影响生长效率。

• 使用新鲜培养基：RD细胞传代后立即补充新鲜培养基，确保细胞快速恢复生长。

RD细胞在不同培养基中的生长差异

• DMEM基础培养基：RD细胞在DMEM中生长迅速，适合常规培养和传代。

• RPMI-1640：适合某些特定实验，但RD细胞生长速度可能较慢。

• MEM：对于营养需求较低的实验条件，RD细胞在此培养基中的生长速度可能不如DMEM快。

避免RD细胞传代损伤的措施

• 温和消化：严格控制RD细胞消化时间，观察细胞脱落状态以避免过度消化。

• 适当离心：使用低速离心避免对RD细胞的机械损伤，建议1000 rpm离心3-4分钟。

• 轻柔操作：在处理RD细胞悬液时，避免剧烈震荡，以保护细胞的完整性。